결과 및 토론
있다는 것을 보여주는 최적의 효소 온도에 따라 달라집 분석 결과 조건에서,β-글루코 Sfßgly 제출되었”고전적인”절차에 대한 최적의 온도를 결정을 즉,그것의 활동에서 결정된 다른 온도(29 46°C)사용하여 동일한 효소 농도가 있습니다., 그런 다음,Sfßgly 활동하는 동안 고정된 온도 분석 결과 결정을 사용하여 파일의 특정 지점에서 제품이 시간에 대한 곡선(S2 도). 이러한 결과에 따라 상대적 활동의 Sfßgly 계산에 뚜렷한 시간(10~120min)를 만들어 가능한 시험 방법의 최적의 온도 플롯 진화하는 동안 분석 실험의 동일한 효소의(그림 1).
A)상이한 온도에서의 분석 동안 Sfßgly 의 상대적 활성., (자주색 십자가)29°C(블루 원)33°C(블루 다이아몬드)37°C(붉은 광장)42°C(녹색 삼각형)46°C 의 수직 선 선 하이라이트 세 가지 다른 분석 결과 시간(20,60,120min). 이러한 분석 시간에 42 및 37°c 에서의 상대 활성은 둥근 상자에 제시되어 분석 전반에 걸쳐 최적 온도의 변화를 보여줍니다. B)효소 분석 기간의 수정으로 인한 최적 온도의 변화. 빨간색 원과 화살표는 42°C 에서 효소 활성의 감소를 강조하며,이는 더 짧은 분석 결과에서 최적 온도였습니다., 파란색 원과 화살표는 37°C 에서의 상대 활성 증가를 보여 주며,이는 더 긴 분석 시간에만 최적 온도였습니다. 효소 농도는 140nM 이었다. 이 완전한 데이터 세트(평균 상대 활동 및 각각의 편차)는 S1 테이블에 표시됩니다.
개요 그림 1 과 같이 보면 상대적인 위치에의 활동 데이터와 관련된 각 온도 변경으로 분석 결과 시간(도 1A). 예를 들어,20 분에서 가장 높은 상대 활성,즉 최적 온도가 42℃에서 관찰되었다., 반대로,60min,최적의 온도 37°C. 따라서 최적의 온도에 의해 변경 5°C 을 수정하여 분석 길이,나머지 조(효소 및 기질의 농도와 버퍼)는 일정하다. 더 극적으로,120 분 분석실험에서,42°c 에 관계되는 활동—이전 최적 온도는-단지 50%에 떨어졌습니다. 따라서,플롯의 온도를 효과에 상대적인 효소 활동을 위한 다양 분석 결과 기간이 명확하게 표시는 다른 모양과 맥시마,즉,최적의 온도,심지어 생산하는 경우에는 같은 효소(도 1B).,
으로 추가적인 최적의 온도가 일정하지 않 매개변수 실험은 위에서 설명했다 반복 사용하여 두 가지 다른 농도의 Sfßgly(그림 2). 85 및 280nM Sfßgly 로 수행 된 실험에 대한 분석 과정에서 활동 데이터의 상대적 위치가 다르게 진화했음이 분명합니다., 플롯의 온도 효소의 활동에 준비된 데이터에서 20 분석 실험을 표시하는 최적의 온도를 위해 280nM Sfßgly 었 42°C(도 2A)는 반면,대한 최적의 온도 이 같은 효소에서 85nM37°C(도 2B). 따라서,최적 온도는 또한 효소 농도에 의해 영향을 받았다.
A)280nM Sfßgly 및 B)85nM Sfßgly 를 사용하여 수행 된 실험에서 상이한 온도에서의 분석 동안 Sfßgly 의 상대 활성., (자주색 십자가)29°C(블루 원)33°C(블루 다이아몬드)37°C(붉은 광장)42°C(녹색 삼각형)46°C. 삽입하여 최적의 온도 그래프로 20 분석 실험에서 각각 효소 농도가 있습니다. 삽입 된 플롯의 비교는 효소 희석으로 인한 최적의 온도 변화를 보여줍니다. 이 완전한 데이터 세트(평균 상대 활동 및 각각의 편차)는 S2 표에 표시됩니다.
에서 결론,최적의 온도 변경과 수정 분석 결과의 시간과 효소 농도가 있습니다., 따라서 본질적인 효소 특성을 반영하는 매개 변수가 아니라 대신 분석 조건의 단순한 결과입니다.
분자의 기초를 관찰의 수정 상대 활동 및 최적의 온도에 의존한다는 사실 효소는 인구에 있지 열역학적 평형에서”고전적인”절차에 대한 최적의 온도가 어떤 용도로도 사용이 가능합니다. 간단하게,이하의 온도에서 가깝고 위 효소 녹는 온도(Tm),활성 효소 농도 지속적으로 감소한의 분석 결과로 인해 열 변성의 단백질이다., 단백질 변성 속도는 Tm 보다 훨씬 낮기 때문에이 온도 범위에서 활성 효소의 농도는 변하지 않습니다. 또한,온도가 높을수록,더 큰 분수로 기판의 인구에 도달한 상태로 전환,증가시키는 반응율이다. 이러한 경향은 효소 활성 분석 전반에 걸쳐 동시입니다., 따라서,온도는 허용 감소 효소 활동에 의한 단백질 변성을 극복하기 반응 속도가 증가로 인해 발생 온도,검색된 효소 활동하는 동안 방울의 과정을 분석하지 않아도 됩니다. 대조적으로,단백질 변성이 일어나지 않는 온도에서,검출 된 활성은 시간의 함수로서 변하지 않는다. 이러한 이유로 분석 과정에서 상대적 활동 데이터가 변경되고 최적 온도가 더 낮은 값으로 이동합니다.,
의 증거는 이러한 이동으로 균형은 더 표시된 줄에서 상대적인 활동에서 관찰되었 실험에서 수행 42 46°C(도 1A),는 가장 가까운 온도 Tm 에 대한 Sfßgly(45°C). 또한,낮은 Sfßgly 농도,짧은 시간에 필요 42°C 에 대한 열 변성을 줄이 활성 효소는 인구의 일부만 열등는 현재 37°C,에서는 Sfßgly 은 안정되어 있습니다., 사실,280nM Sfßgly,그것은 70min 에서 42°C 를 줄이는 활성 효소 농도 수준에서는 상대적인 활동이었다 그것 보다는 더 낮 37°C(도 2A)는 반면,이러한 전환 지점에서 발생한 40 분 140nM Sfßgly(도 1A). 마지막으로,가장 낮은 단백질 농도 사용(85nM),상대적으로 활동에 대한 데이터를 42 37°C 는 이미 교 위치에서 10min(도 2B).,
하는 메커니즘을 결정의 최적의 온도차는 제안,우리는 반복되는 동일한 실험과 함께 고온 β-글루코 bglTm,에서 Thermatoga maritima,는 Tm95°C 보다 훨씬 더 높은 46°C. 따라서,bglTm 안정된 온도 범위에 사용되는 실험,결과적으로,인구는 활성 효소의 변경되지 않는 동안 분석하지 않아도 됩니다. 균형 변위 함수로서의 분석 결과 온도 및 효소 Tm 적용되지 않습 여기에,그리고 예상대로,상대적으로 활동 데이터를(도 3A)지 않았고 스위치의 위치상 시간., 또한,”최적의 온도 플롯”여 지속적으로 증가하는 라인의 결과에서 독점적으로 온도를 효과 확률에는 상기 기판에 도달한 상태로 전환. 이 플롯은 분석 시간에 의존하지 않았다(도 3B).
A)상이한 온도에서 분석실험 전반에 걸쳐 bglTm 의 상대적 활성. (자주색 십자가)29°C(블루 원)33°C(블루 다이아몬드)37°C(붉은 광장)42°C(녹색 삼각형)46°C.B)효과의 분석 결과 시간에 상대적인 활동입니다., 효소 농도는 7.5nM 이었다. 이 완전한 데이터 세트(평균 상대 활동 및 각각의 편차)는 S3 테이블에 표시됩니다.
따라서,클래식 종 모양의 곡선의”최적의 온도 플롯”관찰되는 경우에만 변성 하 고 효소 활동을 하는 동안 분석하지 않아도 됩니다. 따라서 이러한 플롯의 가장 높은 지점을”최적 온도”라고 부르는 것이 바람직한지 의문을 제기 할 수 있습니다.
이러한 발언은 기술적 인 문제를 넘어 확장됩니다., 의 이용을”최적의 온도”에 대한 효소 특성에서 발생할 수 있습 잘못된 운동 매개 변수(Km,Ki 고 도심 공항)의 존재로 인해 변성된 단백질 샘플에서 초기 평가 결정. 중요한 것은,고려에 의해 분석 결과 조건은”의 채택 최적의 온도”에 따라 결정된 벤치 조건에 대한 대규모에서 사용하는,현저하게 차이가 분석 결과에서 시간과 효소 농도에서 발생할 수 있습 감소 반응율,낮은 제품 수율 및 금융 손실이다.