Laut einem Bericht der Mukoviszidose-Stiftung aus dem Jahr 2005 wird Staphylococcus aureus sehr häufig aus den Atemwegen von Mukoviszidose-Patienten (im Durchschnitt ∼52% der Patienten) gewonnen und ist einer der ersten Erreger, die von Säuglingen und Kindern mit CF (1, 3 ) gewonnen wurden., Die Methoden, mit denen dieser Organismus rechtzeitig erkannt und identifiziert und genaue Anfälligkeitsmuster erzeugt werden, sind wichtig für die kritische Versorgung und die Ergebnisse von CF-Patienten.
Die Laboratorien, die Atemkulturen für CF-Patienten durchführen, sind sich der Zeit bewusst, die erforderlich ist, um Krankheitserreger auszuschließen oder auszuschließen und geeignete Anfälligkeitsdaten für diese Krankheitserreger bereitzustellen. S. aureus ist nur einer von mehreren Erregern, die für den Nachweis in dieser Patientenpopulation von entscheidender Bedeutung sind; andere umfassen Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia und verwandte spp.,, Stenotrophomonas maltophilie, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae und Streptococcus pneumoniae sowie Mykobakterien und Viren. Da Kulturen, die an Proben von CF-Patienten durchgeführt werden, arbeitsintensiv sind und die Verwendung vieler Medientypen erfordern, werden häufig selektive Medien verwendet. Diese Medien minimieren das Wachstum der normalen Flora und ermöglichen es, potenzielle Krankheitserreger leichter aus der komplexen Mikroflora dieser Atmungsproben zu gewinnen., Eines dieser selektiven Medien ist Mannitolsalz-Agar (MSA), das zur selektiven und differentiellen Wiederherstellung von Isolaten von S. aureus verwendet wird (die auf diesem Agar gelb erscheinen; Koagulase-negative Staphylokokken bleiben die Farbe des Agars ). Gegenwärtig werden jedoch nicht selektive/nichtdifferenzielle Medien zur Verwendung bei der Durchführung von Identifizierungsmethoden für S. aureus und zur Herstellung von Suspensionen zur Verwendung bei Suszeptibilitätstests an einem Vitek-2-Instrument empfohlen. Um die Zeit und den Aufwand zu verringern, die mit der Identifizierung und Anfälligkeitsprüfung von S verbunden sind., aureus aus respiratorischen Kulturen von CF-Patienten wurde diese Studie durchgeführt, um festzustellen, ob MSA zur endgültigen Identifizierung sowie zur Vorbereitung von Suspensionen für Suszeptibilitätstests im Vitek-2-System verwendet werden kann.
(Ein Teil dieser Arbeit wurde zuvor veröffentlicht .)
Einhundert Isolate von S. aureus, davon 69 Oxacillin-resistente S. aureus und 31 Oxacillin-anfällige S., aureus, die von März bis Dezember 2005 von CF-Patienten geborgen wurden, wurden sowohl auf Blut-Agar-(BA) – als auch auf MSA-Platten subkultiviert und dann mit GPS-61-Karten auf einem Vitek-2-Instrument auf Anfälligkeit getestet. Anfälligkeit Muster wurden dann im Vergleich für jede diskrepanten Ergebnisse., Gemäß routinemäßigem Laborprotokoll wurden diese Organismen auch durch Disk-Diffusion auf einer 100-mm-Mueller-Hinton-Agar-Platte auf Anfälligkeit für die folgenden Antibiotika getestet: Cefoxitin (zur Bestätigung der Oxacillin-Resistenz), Trimethoprim-Sulfamethoxazol (da es nicht in der Batterie von antimikrobiellen Mitteln auf der GPS-61-Karte enthalten ist), Clindamycin und Erythromycin (zur Bestimmung der induzierbaren Clindamycin-Resistenz) und Vancomycin (zur Überprüfung eines Wachstumsfilms bis zum Rand der Scheibe als Indikation).mögliche Vancomycin-Resistenz).,
Darüber hinaus wurden die jüngsten respiratorischen Kulturberichte für alle CF-Patienten mit im Jahr 2005 eingereichten Proben überprüft. Diese Überprüfung wurde durchgeführt, um festzustellen, wie oft gelbe Kolonien, die auf der MSA-Platte nachgewiesen wurden, definitiv als S. aureus identifiziert wurden.
Siebenundneunzig Prozent der 69 Oxacillin-resistenten und 31 Oxacillin-anfälligen S. aureus-Isolate, die sich von CF-Patienten erholten, zeigten eine genaue Übereinstimmung mit den Interpretationen der Anfälligkeit, unabhängig davon, ob sie aus dem MSA-oder BA-Medium entnommen wurden., Beim Vergleich der mit MSA-oder BA-Platten erhaltenen Suszeptibilitätstestergebnisse wurden nur drei Diskrepanzen festgestellt.
Zwei Isolate zeigten diskrepante Ergebnisse in Bezug auf Erythromycin. In einem Fall war das von der BA-Platte getestete Isolat resistent, während Zwischenprodukt von der MSA-Platte getestet wurde; Im zweiten Fall wurde das Gegenteil beobachtet (Erythromycin-Zwischenprodukt auf der BA-Platte und Erythromycin-resistent auf der MSA-Platte)., Im dritten und letzten Fall war das diskrepante Ergebnis mit Clindamycin; In diesem Fall war das Isolat resistent gegen Clindamycin, wenn es von der BA-Platte und intermediär von der MSA-Platte getestet wurde. Alle drei Isolate waren D-Test positiv und würden daher als Clindamycin und Erythromycin resistent auf der Grundlage der Disk Diffusion D-Test berichtet worden., Alle anderen antimikrobiellen Mittel, einschließlich Ampicillin-Sulbactam, Chloramphenicol, Gentamicin, Chinupristin-Dalfopristin (Synercid), Rifampin, Oxacillin, Cefazolin, Linezolid und Vancomycin, zeigten die gleichen Ergebnisse auf der GP-61 Vitek-2-Karte, unabhängig davon, welches Medium zum Testen verwendet wurde.
Die jüngsten Kulturberichte für alle CF-Patienten mit Proben, die im Jahr 2005 eingereicht wurden (nur ein Bericht pro Patient wurde überprüft, um Duplikate innerhalb des Jahres auszuschließen), wurden überprüft, um festzustellen, ob gelbe Kolonien auf MSA-Platten tatsächlich Isolate von S. aureus waren., Zweihundertsiebenenberichte wurden überprüft, und es wurde festgestellt, dass in >98% der Fälle, wenn gelbe Kolonien in Mengen von >1+ (1+ ist definiert als Wachstum nur im ersten Quadranten des Streifens) auf der MSA-Platte gefunden wurden, der Organismus letztendlich als S. aureus identifiziert wurde, nachdem er auf eine BA-Platte subkultiviert und mit routinemäßigen Labormethoden getestet worden war (ein Gleitkoagulasetest gefolgt von einem Röhrenkoagulasetest falls erforderlich).
MSA wird seit vielen Jahren als selektives, differentielles Medium zur Isolierung von S eingesetzt., aureus und wird seit langem als eines der selektiven Medien zur Verwendung mit den Atemproben von CF-Patienten empfohlen (4). Kürzlich wurde berichtet, dass ein neuer selektiver Agar, CHROMagar Staph aureus, auch für die selektive und differentielle Verwendung mit S. aureus-Isolaten nützlich ist (2, 4). Flayhart et al. (2) berichtet, dass die Identifizierung von S. aureus von diesem Medium ohne zusätzliche Tests mit 100% Spezifität gemeldet werden könnte, die die 95% Genauigkeitsanforderung des CLSI (ehemals NCCLS) M35-A-Dokuments zur Verwendung als akzeptabler Einzelschnelltest zur Identifizierung von Organismen (2, 5) überschreiten., In Bezug auf diese Aussage aus der Studie von Flayhart und Kollegen wurde kürzlich eine Studie von Gilligan et al. (4) heißt es: „Es ist sehr wahrscheinlich, dass ähnliche Ergebnisse mit MSA erzielt werden, aber diese Bewertung wurde kürzlich nicht durchgeführt.“Über 200 Patientenberichte wurden in der vorliegenden Studie überprüft, um die Leistung von MSA für den Nachweis von S. aureus aus CF-Atmungskulturen zu bewerten, und die Überprüfung zeigte, dass MSA auch S genau identifizieren kann., aureus (>98%) wenn die richtige chromogene Reaktion stattfindet und eine >1+ Ebene geeigneter gelber Kolonien auf dem Medium isoliert ist. Selten wurden gelbe Kolonien in Mengen von ≤1+ entweder als Koagulase-negative Staphylokokken-oder Corynebacterium-Spezies identifiziert. Wenn gelbe Kolonien auf MSA in Mengen von ≤1 + gezüchtet werden oder wenn eine Mischung von Organismen gezüchtet wird, sollten routinemäßige Isolations-und Identifikationsverfahren durchgeführt werden, um das Vorhandensein von S. aureus in diesen Kulturen auszuschließen.,
Die Fähigkeit, genaue Suszeptibilitätstests in einem Vitek-2-Instrument mit Isolaten durchzuführen, die direkt von MSA-Platten entnommen wurden, wurde ebenfalls bewertet. Für 97% der Isolate wurde eine Einigung erzielt, wobei nur drei diskrepante Isolate und nur ein Antibiotikum pro Isolat festgestellt wurden. Diese drei Organismen zeigten Abweichungen in der Anfälligkeit für Erythromycin (2 Isolate) oder Clindamycin (1 Isolat), und es wurden keine Diskrepanzen zur Bestimmung des Vorhandenseins von Oxacillinresistenz (69 Isolate) oder Oxacillin-Anfälligkeit (31 Isolate) festgestellt. Da alle unsere S., aureus-Isolate wurden auch auf das Vorhandensein einer induzierbaren Clindamycinresistenz getestet Mit dem D-Test wurden die Isolate ordnungsgemäß als resistent gegen Clindamycin und Erythromycin gemeldet, da alle drei diskrepanten Organismen D-Test positiv waren. Dies ähnelt Berichten über genaue Suszeptibilitätsergebnisse aus der Bewertung der Verwendung von Kolonien direkt aus dem chromosomalen Staph aureus-Medium, die von Flayhart und Kollegen durchgeführt wurden (2).
Abschließend, obwohl die Studie isoliert von S., aureus wurden auf MSA-und BA-Platten subkultiviert, bevor sie auf Anfälligkeit getestet wurden, Man könnte vernünftigerweise aus diesen Ergebnissen zusammenfassen, dass Suszeptibilitätstests von angemessen reinen, isolierten und inkubierten Kolonien direkt aus MSA, die mit Proben geimpft wurden, mit ähnlicher Sicherheit durchgeführt werden konnten, ohne dass Subkultur auf einem nicht selektiven Medium vor dem Testen erforderlich war. Zusätzliche prospektive Studien mit klinischen Proben sind erforderlich, um diese Ergebnisse zu validieren., Darüber hinaus können Organismen, die die charakteristischen gelben Kolonien auf MSA-Platten in Mengen von >1+ aufweisen, ohne weitere Identifikationstests als S. aureus gemeldet werden, wobei >98% ig ist. Diese Methoden können nicht nur die Zeit verringern, die für die Erkennung und Anfälligkeitsprüfung von S. aureus für diese Patientenpopulation benötigt wird, sondern auch die Kosten für das Labor senken, indem einige Subkulturmedien und Identifikationsreagenzien eliminiert werden, die derzeit bei der Berichterstattung von S. aureus aus CF-Proben verwendet werden., Darüber hinaus besteht bei der Nutzung von MSA zu seinem maximalen Potenzial in Bezug auf CF-respiratorische Kulturen keine Notwendigkeit für die Zugabe von neueren, teureren selektiven Medien.