según un informe de la Fundación de Fibrosis Quística en 2005, Staphylococcus aureus se recupera con mucha frecuencia de las vías respiratorias de los pacientes con fibrosis quística (FQ) (en promedio, 5 52% de los pacientes ) y es uno de los primeros patógenos recuperados de bebés y niños que sufren FQ (1, 3)., Los métodos utilizados para detectar e identificar este organismo de manera oportuna y para producir patrones de susceptibilidad precisos son importantes para la atención crítica y los resultados para los pacientes con FQ.
Los laboratorios que realizan cultivos respiratorios para pacientes con FQ conocen bien el tiempo necesario para descartar o descartar patógenos y proporcionan datos de susceptibilidad adecuados para estos patógenos. S. aureus es solo uno entre varios patógenos considerados cruciales para la detección en esta población de pacientes; otros incluyen Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia y spp relacionadas.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae y Streptococcus pneumoniae, así como micobacterias y virus. Dado que los Cultivos realizados en muestras recolectadas de pacientes con FQ son intensivos en mano de obra e implican el uso de muchos tipos de medios, a menudo se utilizan medios selectivos. Estos medios minimizan el crecimiento de la flora normal y permiten que los patógenos potenciales se recuperen más fácilmente de la compleja microflora de estos especímenes respiratorios., Uno de estos medios selectivos es el manitol salt agar (MSA), que se utiliza para la recuperación selectiva y diferencial de aislados de S. aureus (que aparecerá amarillo en este agar; estafilococos coagulasa-negativos seguirá siendo el color del agar ). Sin embargo, actualmente se recomienda el uso de medios no selectivos/no diferenciales para realizar Métodos de identificación de S. aureus y preparar suspensiones para su uso en pruebas de susceptibilidad en un instrumento Vitek-2. Con el fin de disminuir el tiempo y los gastos asociados a la identificación y pruebas de susceptibilidad de S., aureus de cultivos respiratorios de pacientes con FQ, este estudio fue realizado para determinar si la AMS podría ser utilizada para la identificación definitiva, así como para la preparación de suspensiones para la prueba de susceptibilidad en el sistema Vitek-2.
(parte de este trabajo fue publicado anteriormente .)
cien aislados de S. aureus, 69 de los cuales eran resistentes a la oxacilina y 31 de los cuales eran sensibles a la oxacilina., aureus, fueron recuperados de pacientes con FQ de marzo a diciembre de 2005, subculturados en placas de agar sanguíneo (BA) y MSA, y luego probados para la susceptibilidad utilizando tarjetas GPS-61 en un instrumento Vitek-2. Luego se compararon los patrones de susceptibilidad para cualquier resultado discrepante., Por protocolo de laboratorio de rutina, estos organismos también fueron probados por difusión de disco en una placa de agar Mueller-Hinton de 100 mm para la susceptibilidad a los siguientes antibióticos: cefoxitina (como confirmación de resistencia a la oxacilina), trimetoprim-sulfametoxazol (ya que no está incluido en la batería de antimicrobianos en la tarjeta GPS-61), clindamicina y eritromicina (para la determinación de resistencia inducible a la clindamicina), y vancomicina (como una comprobación de una película de crecimiento hasta el borde del disco como posible resistencia a vancomicina).,
además, se revisaron los informes de cultivo respiratorio más recientes para todos los pacientes con FQ con muestras presentadas en el año 2005. Esta revisión se realizó con el fin de determinar con qué frecuencia las colonias amarillas detectadas en la placa de AMS se identificaron definitivamente como S. aureus.
noventa y siete por ciento de los 69 aislados de S. aureus resistentes a la oxacilina y 31 susceptibles a la oxacilina recuperados de pacientes con FQ mostraron concordancia exacta con las interpretaciones de susceptibilidad, tanto si fueron tomados del medio de AMS como de BA., Solo se observaron tres discrepancias al comparar los resultados de las pruebas de susceptibilidad obtenidas con placas de AMS o BA.
dos aislados presentaron resultados discrepantes con respecto a la eritromicina. En un caso, el aislado probado de la placa BA era resistente mientras que la prueba intermedia de la placa MSA; en el segundo caso, se observó lo contrario (eritromicina intermedia en la placa BA y eritromicina resistente en la placa MSA)., En el tercer y último caso, el resultado discrepante fue con la clindamicina; en este caso, el aislado fue resistente a la clindamicina cuando se probó desde la placa BA y el intermedio cuando se probó desde la placa MSA. Los tres aislados fueron positivos en la prueba D y, por lo tanto, habrían sido notificados como resistentes a la clindamicina y eritromicina según la prueba D de difusión en disco., Todos los demás antimicrobianos, que incluyeron ampicilina-sulbactam, cloranfenicol, GENTAMICINA, quinupristina-dalfopristina (Synercid), rifampicina, oxacilina, cefazolina, linezolid y vancomicina, mostraron los mismos resultados en la tarjeta GP-61 Vitek-2, independientemente del medio utilizado para la prueba.
los informes de cultivo más recientes para todos los pacientes con FQ con muestras presentadas en el año 2005 (solo se revisó un informe por paciente para excluir duplicados dentro del año) se revisaron para determinar si las colonias amarillas observadas en las placas de AMS eran de hecho aislados de S. aureus., Se revisaron doscientos siete informes, y se encontró que en >el 98% de los casos, si se encontraron colonias amarillas en cantidades de >1+ (1+ se define como crecimiento solo en el primer cuadrante de rayas) en la placa de MSA, entonces el organismo se identificó finalmente como S. aureus después de ser subculturado en una placa BA y probado por métodos de laboratorio de rutina (se siguió una prueba de coagulasa de deslizamiento por una prueba de la coagulasa del tubo si es necesario).
la MSA ha sido utilizada durante muchos años como un medio selectivo y diferencial para el aislamiento de S., aureus y ha sido recomendado durante mucho tiempo como uno de los medios selectivos para su uso con muestras respiratorias de pacientes con FQ (4). Recientemente, un nuevo agar selectivo, CHROMagar Staph aureus, también fue reportado como útil para el uso selectivo y diferencial con aislados de S. aureus (2, 4). Flayhart et al. (2) informó de que la identificación de S. aureus podría ser reportada a partir de este medio sin pruebas adicionales con una especificidad del 100%, superando el requisito de precisión del 95% del CLSI (anteriormente NCCLS) M35-un documento para su uso como una prueba rápida única aceptable para la identificación de organismos (2, 5)., Con respecto a esta declaración del estudio de Flayhart y sus colegas, Un reciente Cumitech escrito por Gilligan et al. (4) afirma que «es muy probable que se obtengan resultados similares con MSA, pero que la evaluación no se ha hecho recientemente.»Más de 200 informes de pacientes fueron revisados en el presente estudio para evaluar el desempeño de la AMS para la detección de S. aureus en cultivos respiratorios de FQ, y la revisión mostró que la AMS también puede identificar con precisión S., aureus (> 98%) si se produce la reacción cromogénica adecuada y hay un >1+ Nivel de colonias amarillas apropiadas aisladas en el medio. Con poca frecuencia, se identificaron colonias amarillas en cantidades ≤1+ como estafilococos coagulasa negativos o especies de Corynebacterium. Si se cultivan colonias amarillas en MSA en cantidades ≤1+ o si se cultiva una mezcla de organismos, entonces se debe proceder con procedimientos de aislamiento e identificación rutinarios para descartar la presencia de S. aureus en estos cultivos.,
también se evaluó la capacidad de realizar pruebas de susceptibilidad precisas en un instrumento Vitek-2 con aislados tomados directamente de las placas de MSA. Se logró un acuerdo para el 97% de los aislados, con solo tres aislados discrepantes y con solo un antibiótico por aislado en cuestión. Estos tres organismos mostraron desviaciones en la susceptibilidad a la eritromicina (2 aislados) o a la clindamicina (1 aislado), y no se observaron discrepancias para determinar la presencia de resistencia a la oxacilina (69 aislados) o la susceptibilidad a la oxacilina (31 aislados). Desde todos nuestros S., los aislados de aureus también fueron probados para la presencia de resistencia inducible a la clindamicina con la prueba D, los aislados fueron reportados adecuadamente como resistentes tanto a la clindamicina como a la eritromicina, ya que los tres organismos discrepantes fueron positivos en la prueba D. Esto es similar a los informes de resultados precisos de susceptibilidad de la evaluación de la utilización de colonias directamente del medio Chromagar Staph aureus realizada por Flayhart y colegas (2).
En conclusión, aunque los aislados del estudio de S., los aureus fueron subculturados en placas de MSA y BA antes de ser probados para la susceptibilidad, uno podría resumir razonablemente de estos hallazgos que la prueba de susceptibilidad de colonias apropiadamente puras, aisladas e incubadas directamente de MSA inoculadas con especímenes podría lograrse con certeza similar sin la necesidad de subcultivo en un medio no selectivo antes de la prueba. Se requieren estudios prospectivos adicionales que utilicen muestras clínicas para validar estos hallazgos., Además, los organismos que muestran las colonias amarillas características en placas de MSA en cantidades de >1+ pueden ser reportados como S. aureus sin más pruebas de identificación, con>98% de confianza. Estos métodos no solo pueden disminuir el tiempo necesario para la detección y las pruebas de susceptibilidad de S. aureus para esta población de pacientes, sino que también pueden disminuir los costos para el laboratorio a través de la eliminación de algunos medios de subcultura y reactivos de identificación utilizados actualmente en la notificación de S. aureus a partir de muestras de FQ., Además, en la utilización de la AMS a su máximo potencial con respecto a los cultivos respiratorios de FQ, no hay necesidad de la adición de medios selectivos más nuevos y más caros.