de Acordo com um relatório da Fundação de Fibrose Cística em 2005, o Staphylococcus aureus é recuperado muito freqüentemente de vias aéreas de fibrose cística (FC) pacientes (em média, ∼52% dos pacientes ) e é um dos primeiros patógenos recuperado de bebês e crianças que sofrem de FC (1, 3)., Os métodos utilizados para detectar e identificar este organismo de forma atempada e para produzir padrões de susceptibilidade precisos são importantes para o cuidado crítico e os resultados para os doentes de CF.os laboratórios que realizam culturas respiratórias para doentes com FC estão bem cientes do tempo necessário para excluir ou excluir agentes patogénicos e fornecem dados de susceptibilidade adequados para estes agentes patogénicos. S. aureus é apenas um entre vários patógenos considerados cruciais para a detecção nesta população de pacientes; outros incluem Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia e spp relacionados.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, bem como mycobacteria e vírus. Uma vez que as culturas realizadas em amostras coletadas de pacientes com CF são trabalhosas e envolvem o uso de muitos tipos médios, meios seletivos são frequentemente utilizados. Estes meios minimizam o crescimento da flora normal e permitem que patógenos potenciais sejam recuperados mais facilmente a partir da microflora complexa destes espécimes respiratórios., Um desses meios seletivos é o ágar-ágar Salgado de manitol (MSA), que é utilizado para a recuperação seletiva e diferenciada de isolados de S. aureus (que aparecerá amarelo neste ágar; estafilococos coagulase-negativos continuará a ser a cor do ágar ). No entanto, recomenda-se actualmente a utilização de meios não selectivos/não diferenciadores para a realização de métodos de identificação de S. aureus e preparação de suspensões para utilização em testes de susceptibilidade num instrumento Vitek-2. A fim de diminuir o tempo e a despesa associados à identificação e teste de susceptibilidade de S., aureus de culturas respiratórias de doentes com CF, este estudo foi realizado para determinar se a MSA poderia ser utilizada para identificação definitiva, bem como para preparar suspensões para testes de susceptibilidade no sistema Vitek-2.
(parte deste trabalho foi publicado anteriormente .)
cem isolados de S. aureus, 69 dos quais eram S. aureus resistentes à oxacilina e 31 dos quais eram S. susceptíveis à oxacilina., aureus, foi recuperado de pacientes do CF de Março a dezembro de 2005, subculturado em ambas as placas de ágar de sangue (BA) e MSA, e depois testado para susceptibilidade usando placas GPS-61 em um instrumento Vitek-2. Padrões de susceptibilidade foram então comparados para quaisquer resultados discrepantes., Por laboratoriais de rotina de protocolo, estes organismos foram também testados por difusão em disco de 100 mm de Mueller-Hinton agar plate para a susceptibilidade aos seguintes antibióticos: cefoxitina (como uma confirmação da resistência à oxacilina), trimetoprim-sulfametoxazol (que não está incluído na bateria de antimicrobianos no GPS-61 cartão), a clindamicina e a eritromicina (para determinação de inflamação induzida por clindamicina resistência), e a vancomicina (como uma verificação para um filme de crescimento até a borda do disco como uma indicação de possível resistência a vancomicina).,além disso, foram revistos os relatórios de cultura respiratória mais recentes para todos os doentes com CF com espécimes submetidos em 2005. Esta revisão foi realizada para determinar com que frequência as colónias amarelas detectadas na placa de MSA foram definitivamente identificadas como S. aureus.noventa e sete por cento dos 69 isolados de S. aureus resistentes à oxacilina e 31 sensíveis à oxacilina recuperados dos doentes com CF mostraram concordância exacta com as interpretações de susceptibilidade, quer tenham sido retirados do MSA ou do meio BA., Apenas três discrepâncias foram observadas aquando da comparação dos resultados dos testes de susceptibilidade obtidos com as placas MSA ou BA.dois isolados tiveram resultados discrepantes em relação à eritromicina. Num caso, o isolado testado a partir da placa BA foi resistente enquanto se testava o intermediário da placa MSA; no segundo caso, verificou-se o inverso (o intermediário eritromicina na placa BA e a eritromicina resistente na placa MSA)., No terceiro e último caso, o resultado discrepante foi com clindamicina; neste caso, o isolado era resistente à clindamicina quando testado a partir da placa BA e intermediário quando testado a partir da placa MSA. Os três isolados foram positivos ao teste D, pelo que teriam sido notificados como resistentes à clindamicina e à eritromicina, com base no teste de difusão D do disco., Todos os outros antimicrobianos, que incluiu a ampicilina-sulbactam, cloranfenicol, gentamicina, quinupristin-dalfopristina (Synercid), rifampicina, oxacilina, cefazolina, linezolida e vancomicina, mostraram os mesmos resultados no GP-61 Vitek-2 cartão, independentemente do meio utilizado para o ensaio.
os relatórios de cultura mais recentes para todos os doentes de CF com espécimes submetidos em 2005 (apenas um relatório por doente foi revisto a fim de excluir duplicados dentro do ano) foram revistos para determinar se as colónias amarelas observadas em placas de MSA eram, de facto, isolados de S. aureus., Duzentos e sete relatórios foram analisados e verificou-se que no >98% dos casos, se o amarelo colônias foram encontrados em quantidades de >1+ (1+ é definido como crescimento apenas no primeiro quadrante de estrias) na placa MAE, em seguida, o organismo foi finalmente identificado como S. aureus após ser subcultured em um BA da chapa e testadas por métodos laboratoriais de rotina (uma apresentação de coagulase teste, seguido de um tubo de teste da coagulase, se necessário).
MSA tem sido usado por muitos anos como um meio diferencial seletivo para o isolamento de S., aureus e tem sido recomendado como um dos meios seletivos para uso em amostras respiratórias de pacientes com CF (4). Recentemente, um novo ágar seletivo, CHROMagar Staph aureus, também foi relatado como útil para uso seletivo e diferencial com isolados de S. aureus (2, 4). Flayhart et al. (2) informou que a identificação de S. aureus poderia ser comunicada a partir deste meio sem testes adicionais com 100% de especificidade, excedendo o requisito de 95% de precisão do CLSI (anteriormente NCCLS) M35-um documento para utilização como um teste rápido único aceitável para a identificação de organismos (2, 5)., No que diz respeito a esta declaração do estudo de Flayhart e colegas, um Cumitech recente de autoria de Gilligan et al. (4) afirma que “é muito provável que se obtenham resultados semelhantes com o MSA, mas essa avaliação não foi efectuada recentemente.”Mais de 200 relatórios de pacientes foram revisados no presente estudo para avaliar o desempenho do MSA para a detecção de S. aureus de culturas respiratórias CF, e a revisão mostrou que o MSA também pode identificar com precisão S., aureus (>98%) SE a reacção cromogénica adequada ocorrer e houver um>1+ Nível de colónias amarelas apropriadas isoladas no meio. Raramente, foram identificadas colónias amarelas em quantidades ≤1+ como estafilococos coagulase negativos ou espécies de Corynebacterium. Se as colónias amarelas forem cultivadas em MSA em quantidades ≤1+ ou se for cultivada uma mistura de organismos, deve proceder-se ao isolamento de rotina e a procedimentos de identificação para excluir a presença de S. aureus nestas culturas.,foi também avaliada a capacidade de realizar testes de susceptibilidade precisos num instrumento Vitek-2 com isolados retirados directamente das placas de MSA. Foi alcançado um acordo para 97% dos isolados, com apenas três isolados discrepantes observados e com apenas um antibiótico por isolado em questão. Estes três organismos apresentaram desvios quer na susceptibilidade à eritromicina (2 isolados) quer à clindamicina (1 isolado), e não foram observadas discrepâncias para determinar a presença de resistência à oxacilina (69 isolados) ou de susceptibilidade à oxacilina (31 isolados). Desde todos os nossos S., os isolados aureus também foram testados para a presença de resistência à clindamicina indutível com o teste D, os isolados foram adequadamente relatados como resistentes à clindamicina e à eritromicina, uma vez que todos os três organismos discrepantes foram positivos ao teste D. Isto é semelhante a relatos de susceptibilidade precisa dos resultados da avaliação da utilização de colônias diretamente a partir do meio Cromagar Staph aureus realizado por Flayhart e colegas (2).em conclusão, embora os isolados do estudo de S., aureus foram subcultured para a MSA e BA placas antes de ser testado para a susceptibilidade, razoavelmente se resumir partir destes resultados, que o teste de susceptibilidade, devidamente puro, isolado, e incubadas colônias diretamente do MSA inoculados com amostras podem ser alcançados com semelhante certeza sem a necessidade de subcultura em um meio não selectivo, antes do teste. São necessários estudos prospectivos adicionais utilizando amostras clínicas para validar estes achados., Além disso, os organismos que apresentem as colónias amarelas características nas placas de MSA em quantidades >1+ podem ser notificados como S. aureus sem mais testes de identificação, com >98% de confiança. Estes métodos podem não só diminuir o tempo necessário para a detecção e teste de susceptibilidade de S. aureus para esta população de doentes, mas também diminuir os custos para o laboratório através da eliminação de alguns meios de subcultura e reagentes de identificação actualmente utilizados na comunicação de S. aureus a partir de espécimes CF., Além disso, ao utilizar MSA ao seu máximo potencial em relação às culturas respiratórias CF, não há necessidade de adição de meios seletivos mais novos e mais caros.