volgens een rapport van de Cystic Fibrosis Foundation in 2005 wordt Staphylococcus aureus zeer vaak teruggevonden in de luchtwegen van cystic fibrosis (CF) patiënten (gemiddeld ∼52% van de patiënten ) en is het een van de eerste pathogenen die worden teruggevonden bij zuigelingen en kinderen die lijden aan CF (1, 3)., De methoden die worden gebruikt om dit organisme tijdig te detecteren en te identificeren en om nauwkeurige gevoeligheidspatronen te produceren zijn belangrijk voor de kritische zorg van en resultaten voor CF patiënten.
die laboratoria die respiratoire culturen uitvoeren voor CF patiënten zijn zich terdege bewust van de tijd die nodig is om ziekteverwekkers uit te sluiten of uit te sluiten en leveren passende gevoeligheidsgegevens voor deze pathogenen. S. aureus is slechts één van de verschillende pathogenen die cruciaal worden geacht voor detectie in deze patiëntenpopulatie; andere omvatten Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia en verwante spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae, en Streptococcus pneumoniae, evenals mycobacteriën en virussen. Aangezien culturen uitgevoerd op monsters verzameld bij CF patiënten arbeidsintensief zijn en het gebruik van vele mediumtypes vereisen, worden vaak selectieve media gebruikt. Deze media minimaliseren de groei van normale flora en laten potentiële ziekteverwekkers gemakkelijker uit de complexe microflora van deze respiratoire specimens worden teruggekregen., Een van deze selectieve media is mannitolzout-agar (MSA), dat wordt gebruikt voor het selectief en differentieel herwinnen van isolaten van S. aureus (die geel zullen verschijnen op deze agar; coagulase-negatieve stafylokokken zullen de kleur van de agar blijven ). Momenteel worden echter niet-selectieve/nietdifferentiële media aanbevolen voor gebruik bij het uitvoeren van identificatiemethoden voor S. aureus en het voorbereiden van suspensies voor gebruik bij gevoeligheidstesten op een Vitek-2 instrument. Om de tijd en kosten in verband met identificatie en gevoeligheidstesten van S. te verminderen., aureus uit respiratoire culturen van CF patiënten, werd deze studie uitgevoerd om te bepalen of MSA kon worden gebruikt voor definitieve identificatie en voor het voorbereiden van suspensies voor gevoeligheidstesten in het Vitek-2 systeem.
(een deel van dit werk werd eerder gepubliceerd .)
honderd isolaten van S. aureus, waarvan 69 oxacilline-resistente S. aureus en 31 oxacilline-gevoelige S., aureus, werden teruggevonden van CF patiënten van maart tot December 2005, subcultureerd op zowel bloed agar (BA) en MSA platen, en vervolgens getest op gevoeligheid met behulp van GPS-61 kaarten op een Vitek-2 instrument. Gevoeligheidspatronen werden vervolgens vergeleken voor afwijkende resultaten., Per routine laboratorium protocol, deze organismen werden ook getest door disk diffusie op een 100-mm Mueller-Hinton agar plaat voor de gevoeligheid voor de volgende antibiotica: cefoxitin (als een bevestiging van oxacillin weerstand), trimethoprim-sulfamethoxazole (als het niet is opgenomen in de batterij van antimicrobiële middelen op de GPS-61-kaart), clindamycine en erythromycine (voor de bepaling van het induceerbare clindamycin weerstand), en vancomycine (zoals een selectievakje voor een film van de groei tot aan de rand van de schijf als een indicatie van mogelijke vancomycine-resistentie).,
daarnaast werden de meest recente respiratoire kweekrapporten voor alle CF patiënten met specimens die in 2005 werden ingediend, beoordeeld. Deze beoordeling werd uitgevoerd om te bepalen hoe vaak gele kolonies gedetecteerd op de MSA plaat definitief werden geïdentificeerd als S. aureus.
zevenennegentig procent van de 69 oxacilline-resistente en 31 oxacilline-gevoelige S. aureus isolaten teruggevonden bij CF patiënten toonden exacte overeenstemming met gevoeligheidsinterpretaties, of ze werden genomen van het MSA of BA medium., Slechts drie discrepanties werden waargenomen bij vergelijking van de resultaten van gevoeligheidstests verkregen met MSA-of BA-platen.
twee isolaten hadden afwijkende resultaten met betrekking tot erytromycine. In één geval was het isolaat dat op de BA-plaat werd getest resistent tijdens het testen van het tussenproduct van de MSA-plaat; in het tweede geval werd het omgekeerde waargenomen (erythromycine tussenproduct op de BA-plaat en erythromycine resistent op de MSA-plaat)., In het derde en laatste geval was het afwijkende resultaat met clindamycine; in dit geval was het isolaat resistent tegen clindamycine bij het testen van de BA-plaat en tussenproduct bij het testen van de MSA-plaat. Alle drie de isolaten waren D-test positief en zouden daarom gerapporteerd zijn als clindamycine en erythromycine resistent op basis van de disk diffusion d-test., Alle andere antimicrobiële stoffen, waaronder ampicilline-sulbactam, chlooramfenicol, gentamicine, quinupristine-dalfopristine (Synercid), rifampine, oxacilline, cefazoline, linezolide en vancomycine, vertoonden dezelfde resultaten op de GP-61 Vitek-2-kaart, ongeacht welk medium werd gebruikt voor het testen.
de meest recente kweekrapporten voor alle CF patiënten met specimens die in het jaar 2005 werden ingediend (slechts één rapport per patiënt werd beoordeeld om duplicaten binnen het jaar uit te sluiten) werden beoordeeld om te bepalen of gele kolonies die op MSA platen werden gezien in feite isolaten van S. aureus waren., Er werden tweehonderd zeven rapporten onderzocht en er werd vastgesteld dat in >98% van de gevallen, indien gele kolonies werden gevonden in hoeveelheden van >1+ (1+ wordt alleen gedefinieerd als groei in het eerste kwadrant van de strepen) op de MSA-plaat, het organisme uiteindelijk werd geïdentificeerd als S. aureus na subcultuurvorming op een BA-plaat en getest volgens routinematige laboratoriummethoden (een dia coagulasetest gevolgd door een tube coagulasetest indien nodig).
MSA wordt al vele jaren gebruikt als een selectief, differentieel medium voor de isolatie van S., aureus en is al lang aanbevolen als een van de selectieve media voor gebruik met respiratoire monsters van CF patiënten (4). Onlangs werd ook gemeld dat een nieuwe selectieve agar, Chromagar stafylokok aureus, nuttig was voor selectief en differentieel gebruik met S. aureus-isolaten (2, 4). Flayhart et al. (2) meldde dat de identificatie van S. aureus met dit medium kon worden gemeld zonder aanvullende tests met 100% specificiteit, waarbij de 95%-nauwkeurigheidseis van de CLSI (voorheen NCCLS) M35-een document voor gebruik als een aanvaardbare enkelvoudige snelle test voor de identificatie van organismen (2, 5) werd overschreden., Met betrekking tot deze verklaring uit de studie van Flayhart en collega ‘ s, een recente Cumitech geschreven door Gilligan et al. (4) stelt dat “het zeer waarschijnlijk is dat soortgelijke resultaten zouden worden verkregen met OSA, maar dat de evaluatie onlangs niet is uitgevoerd.”In de huidige studie werden meer dan 200 patiëntrapporten beoordeeld om de prestaties van MSA voor de detectie van S. aureus uit CF respiratoire culturen te evalueren, en de beoordeling toonde aan dat MSA ook nauwkeurig S. kan identificeren., aureus (>98%) als de juiste chromogene reactie plaatsvindt en er een >1+ niveau van geschikte gele kolonies geïsoleerd op het medium is. Zelden werden gele kolonies in hoeveelheden ≤1+ geïdentificeerd als coagulase-negatieve stafylokokken of als Corynebacterium-species. Als gele kolonies worden geteeld op MSA in hoeveelheden van ≤1+ of als een mengsel van organismen wordt geteeld, dan moet men doorgaan met routine isolatie en identificatie procedures om de aanwezigheid van S. aureus in deze culturen uit te sluiten.,
het vermogen om nauwkeurige gevoeligheidstesten uit te voeren in een Vitek-2-instrument met isolaten die direct van MSA-platen zijn genomen, werd ook beoordeeld. Er werd overeenstemming bereikt voor 97% van de isolaten, met slechts drie afwijkende isolaten en met slechts één antibioticum per isolaat in kwestie. Deze drie organismen vertoonden afwijkingen in de gevoeligheid voor erytromycine (2 isolaten) of clindamycine (1 isolaat) en er werden geen afwijkingen waargenomen voor het bepalen van de aanwezigheid van oxacillineresistentie (69 isolaten) of oxacillinegevoeligheid (31 isolaten). Sinds Al Onze S., aureus-isolaten werden ook getest op de aanwezigheid van induceerbare clindamycine-resistentie met de D-test, de isolaten werden correct gerapporteerd als resistent tegen zowel clindamycine als erytromycine, aangezien alle drie de discrepante organismen D-test positief waren. Dit is vergelijkbaar met rapporten van nauwkeurige gevoeligheidsresultaten van de evaluatie van het gebruik van kolonies rechtstreeks uit CHROMagar stafylokok aureus medium uitgevoerd door Flayhart en collega ‘ s (2).
concluderend, hoewel de studie isolaten van S., aureus werden gesubcultureerd op MSA-en BA-platen alvorens op gevoeligheid te worden getest, kan men redelijkerwijs uit deze bevindingen samenvatten dat gevoeligheidstesten van adequaat zuivere, geïsoleerde en geïncubeerde kolonies rechtstreeks uit MSA geïnoculeerd met specimens met vergelijkbare zekerheid konden worden bereikt zonder dat subcultuur op een niet-selectief medium voorafgaand aan het testen nodig was. Aanvullende prospectieve studies die klinische specimens gebruiken zijn vereist om deze bevindingen te valideren., Bovendien kunnen organismen met de karakteristieke gele kolonies op MSA-platen in hoeveelheden van >1+ als S. aureus worden gerapporteerd zonder verdere identificatietests, met >98% betrouwbaarheidsinterval. Deze methoden kunnen niet alleen de tijd verminderen die nodig is voor detectie en gevoeligheidstesten van S. aureus voor deze patiëntenpopulatie, maar kunnen ook de kosten voor het laboratorium verlagen door de eliminatie van sommige subcultuurmedia en identificatiereagentia die momenteel worden gebruikt in de rapportage van S. aureus van CF-specimens., Bovendien, bij het gebruik van MSA om zijn maximale potentieel met betrekking tot CF respiratoire culturen, is er geen noodzaak voor de toevoeging van nieuwere, duurdere selectieve media.