Secondo un rapporto della Fondazione Fibrosi Cistica nel 2005, lo Staphylococcus aureus è recuperato molto spesso dalle vie aeree di fibrosi cistica (CF) pazienti (in media, circa il 52% dei pazienti ) ed è uno dei primi agenti patogeni recuperati dai neonati e bambini affetti da fibrosi cistica (1, 3)., I metodi utilizzati per rilevare e identificare questo organismo in modo tempestivo e per produrre modelli di suscettibilità accurati sono importanti per la cura critica e i risultati per i pazienti affetti da FC.
Quei laboratori che eseguono colture respiratorie per pazienti affetti da FC sono ben consapevoli del tempo necessario per escludere o escludere gli agenti patogeni e forniscono dati di suscettibilità appropriati per questi agenti patogeni. S. aureus è solo uno tra diversi agenti patogeni considerati cruciali per il rilevamento in questa popolazione di pazienti; altri includono Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia e spp correlati.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae, così come micobatteri e virus. Poiché le colture eseguite su campioni raccolti da pazienti CF sono ad alta intensità di lavoro e comportano l’uso di molti tipi di media, i media selettivi sono spesso utilizzati. Questi mezzi minimizzano la crescita della flora normale e permettono che i patogeni potenziali siano recuperati più facilmente dalla microflora complessa di questi campioni respiratori., Uno di questi mezzi selettivi è l’agar di sale di mannitolo (MSA), che viene utilizzato per il recupero selettivo e differenziato degli isolati di S. aureus (che apparirà giallo su questo agar; gli stafilococchi coagulasi-negativi rimarranno il colore dell’agar ). Tuttavia, i supporti non selettivi/non differenziali sono attualmente raccomandati per l’uso nell’esecuzione di metodi di identificazione per S. aureus e nella preparazione di sospensioni per l’uso in test di suscettibilità su uno strumento Vitek-2. Al fine di ridurre il tempo e le spese associate all’identificazione e alla prova di suscettibilità di S., aureus dalle colture respiratorie dai pazienti CF, questo studio è stato intrapreso per determinare se MSA potesse essere usato per identificazione definitiva come pure per preparare le sospensioni per la prova di sensibilità nel sistema Vitek-2.
(Parte di questo lavoro è stato pubblicato in precedenza .)
Cento isolati di S. aureus, 69 dei quali erano S. aureus resistenti all’ossacillina e 31 dei quali erano S sensibili all’ossacillina., aureus, sono stati recuperati da pazienti CF da marzo a dicembre 2005, subculturati su entrambi agar sangue (BA) e piastre MSA, e poi testato per la suscettibilità utilizzando schede GPS-61 su uno strumento Vitek-2. I modelli di suscettibilità sono stati quindi confrontati per eventuali risultati discrepanti., Al di laboratorio di routine protocollo, questi organismi sono stati testati anche da disco di diffusione a 100 mm di Mueller-Hinton agar per la suscettibilità alle seguenti antibiotici: cefoxitina (come conferma di oxacillina resistenza), trimetoprim-sulfametossazolo (in quanto non è incluso nella batteria di antimicrobici sul GPS-61 carte), clindamicina ed eritromicina (per la determinazione di inducibile clindamycin resistenza), e vancomicina (come un controllo per un film di crescita fino al bordo del disco come un’indicazione di possibili vancomicina).,
Inoltre, sono stati riesaminati i più recenti rapporti di coltura respiratoria per tutti i pazienti affetti da FC con campioni presentati nel 2005. Questa revisione è stata eseguita al fine di determinare la frequenza con cui le colonie gialle rilevate sulla piastra MSA sono state definitivamente identificate come S. aureus.
Il novantasette percento dei 69 isolati di S. aureus resistenti all’oxacillina e 31 sensibili all’oxacillina recuperati da pazienti affetti da CF ha mostrato un esatto accordo con le interpretazioni di suscettibilità, indipendentemente dal fatto che siano stati prelevati dal mezzo MSA o BA., Solo tre discrepanze sono state notate dopo il confronto dei risultati dei test di suscettibilità ottenuti con piastre MSA o BA.
Due isolati hanno avuto risultati discrepanti riguardo all’eritromicina. In un caso, l’isolato testato dalla piastra BA era resistente durante il test intermedio dalla piastra MSA; nel secondo caso, è stato osservato il contrario (eritromicina intermedia sulla piastra BA e eritromicina resistente sulla piastra MSA)., Nel terzo e ultimo caso, il risultato discrepante era con clindamicina; in questo caso, l’isolato era resistente alla clindamicina quando testato dalla piastra BA e intermedio quando testato dalla piastra MSA. Tutti e tre gli isolati sono risultati positivi al test D e pertanto sarebbero stati segnalati come resistenti alla clindamicina e all’eritromicina in base al test di diffusione del disco D., Tutti gli altri antimicrobici, che includevano ampicillina-sulbactam, cloramfenicolo, gentamicina, quinupristina-dalfopristina (Synercid), rifampicina, oxacillina, cefazolina, linezolid e vancomicina, hanno mostrato gli stessi risultati sulla scheda GP-61 Vitek-2, indipendentemente dal mezzo utilizzato per il test.
I rapporti di coltura più recenti per tutti i pazienti CF con campioni presentati nell’anno 2005 (solo un rapporto per paziente è stato rivisto al fine di escludere i duplicati entro l’anno) sono stati esaminati per determinare se le colonie gialle osservate sulle placche MSA erano in realtà isolati di S. aureus., Duecento sette rapporti sono stati rivisti, e si è constatato che nel >98% dei casi, se il giallo colonie sono stati trovati in quantità >1+ (1+ è definito come la crescita solo nel primo quadrante di striature) sulla MSA piastra, quindi l’organismo è stato infine identificato come S. aureus dopo essere subcolture su un BA piastra e testato da laboratorio di routine metodi (una diapositiva coagulasi di prova seguito da un tubo coagulasi test, se necessario).
MSA è stato usato per molti anni come mezzo selettivo e differenziale per l’isolamento di S., aureus ed è stato a lungo raccomandato come uno dei mezzi selettivi per l’uso con campioni respiratori di pazienti affetti da FC (4). Recentemente, un nuovo agar selettivo, CHROMagar Staph aureus, è stato anche segnalato per essere utile per l’uso selettivo e differenziale con S. aureus isolati (2, 4). Flayhart et al. (2) ha riferito che l’identificazione di S. aureus potrebbe essere riportata da questo mezzo senza ulteriori test con una specificità del 100%, superiore al requisito di precisione del 95% del documento CLSI (precedentemente NCCLS) M35-A da utilizzare come test rapido singolo accettabile per l’identificazione di organismi (2, 5)., Per quanto riguarda questa affermazione dallo studio di Flayhart e colleghi, un recente Cumitech scritto da Gilligan et al. (4) afferma che “È molto probabile che risultati simili sarebbero stati ottenuti con MSA, ma che la valutazione non è stata fatta di recente.”Nel presente studio sono state esaminate oltre 200 segnalazioni di pazienti per valutare le prestazioni di MSA per il rilevamento di S. aureus da colture respiratorie CF, e la revisione ha dimostrato che MSA può anche identificare con precisione S., aureus (>98%) se la reazione cromogenica corretta ha luogo e c’è un>1+ livello di colonie gialle appropriate isolate sul mezzo. Raramente, colonie gialle in quantità ≤1+ sono state identificate come stafilococchi coagulasi-negativi o specie di Corynebacterium. Se le colonie gialle vengono coltivate su MSA in quantità ≤1+ o se viene coltivata una miscela di organismi, si dovrebbe procedere con procedure di isolamento e identificazione di routine per escludere la presenza di S. aureus in queste colture.,
È stata anche valutata la capacità di eseguire test di suscettibilità accurati in uno strumento Vitek-2 con isolati prelevati direttamente dalle piastre MSA. È stato raggiunto un accordo per il 97% degli isolati, con solo tre isolati discrepanti e con un solo antibiotico per isolato in questione. Questi tre organismi hanno mostrato deviazioni nella sensibilità all’eritromicina (2 isolati) o alla clindamicina (1 isolato) e non sono state notate discrepanze per determinare la presenza di resistenza all’oxacillina (69 isolati) o sensibilità all’oxacillina (31 isolati). Dal momento che tutti i nostri S., gli isolati aureus sono stati anche testati per la presenza di resistenza inducibile alla clindamicina con il test D, gli isolati sono stati correttamente segnalati come resistenti sia alla clindamicina che all’eritromicina, poiché tutti e tre gli organismi discrepanti erano positivi al test D. Questo è simile ai rapporti di risultati di suscettibilità accurati dalla valutazione dell’utilizzo di colonie direttamente da CHROMagar Staph aureus medium effettuata da Flayhart e colleghi (2).
In conclusione, anche se lo studio isola di S., aureus sono stati sottoculturati su piastre MSA e BA prima di essere testati per la suscettibilità, si potrebbe ragionevolmente riassumere da questi risultati che il test di suscettibilità di colonie opportunamente pure, isolate e incubate direttamente da MSA inoculato con campioni potrebbe essere ottenuto con simile certezza senza la necessità di sottocultura su un mezzo non selettivo prima del test. Ulteriori studi prospettici che utilizzano campioni clinici sono necessari per convalidare questi risultati., Inoltre, gli organismi che mostrano le caratteristiche colonie gialle sulle placche MSA a quantità di >1+ possono essere segnalati come S. aureus senza ulteriori test di identificazione, con >confidenza del 98%. Questi metodi non solo possono ridurre il tempo necessario per il rilevamento e la prova di suscettibilità di S. aureus per questa popolazione di pazienti, ma possono anche ridurre i costi per il laboratorio attraverso l’eliminazione di alcuni mezzi di sottocultura e reagenti di identificazione attualmente utilizzati nella segnalazione di S. aureus da campioni CF., Inoltre, nell’utilizzare MSA al suo massimo potenziale per quanto riguarda le colture respiratorie CF, non è necessario l’aggiunta di supporti selettivi più recenti e più costosi.