selon un rapport de la fondation de la fibrose kystique en 2005, Staphylococcus aureus est récupéré très fréquemment dans les voies respiratoires des patients atteints de fibrose kystique (en moyenne, 52% des patients) et est l’un des premiers agents pathogènes récupérés chez les nourrissons et les enfants atteints de mucoviscidose (1, 3)., Les méthodes utilisées pour détecter et identifier cet organisme en temps opportun et pour produire des schémas de sensibilité précis sont importantes pour les soins intensifs et les résultats pour les patients atteints de mucoviscidose.
Les laboratoires qui effectuent des cultures respiratoires pour les patients atteints de mucoviscidose sont bien conscients du temps nécessaire pour éliminer ou éliminer les agents pathogènes et fournir des données de susceptibilité appropriées pour ces agents pathogènes. S. aureus n’est qu’un parmi plusieurs pathogènes considérés comme cruciaux pour la détection dans cette population de patients; d’autres comprennent Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia et des espèces apparentées.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae et Streptococcus pneumoniae, ainsi que mycobactéries et virus. Étant donné que les cultures effectuées sur des échantillons prélevés sur des patients atteints de mucoviscidose nécessitent beaucoup de main-d’œuvre et impliquent l’utilisation de nombreux types de milieux, des milieux sélectifs sont souvent utilisés. Ces milieux minimisent la croissance de la flore normale et permettent de récupérer plus facilement les agents pathogènes potentiels de la microflore complexe de ces échantillons respiratoires., L’un de ces milieux sélectifs est la gélose au sel de mannitol (MSA), qui est utilisée pour récupérer sélectivement et différentiellement des isolats de S. aureus (qui apparaîtra en jaune sur cette gélose; les staphylocoques à coagulase négative resteront la couleur de la gélose ). Cependant, les milieux non sélectifs / Non différentiels sont actuellement recommandés pour l’exécution de méthodes d’identification de S. aureus et la préparation de suspensions pour l’utilisation dans les tests de sensibilité sur un instrument Vitek-2. Afin de réduire le temps et les dépenses associés à l’identification et aux tests de sensibilité de S., aureus à partir de cultures respiratoires de patients atteints de mucoviscidose, cette étude a été entreprise pour déterminer si la MSA pouvait être utilisée pour l’identification définitive ainsi que pour la préparation de suspensions pour les tests de sensibilité dans le système Vitek-2.
(Une partie de ce travail a été publiée précédemment .)
cent isolats de S. aureus, dont 69 étaient des S. aureus résistants à L’oxacilline et 31 étaient des S. aureus sensibles à l’oxacilline., aureus, ont été récupérés chez des patients atteints de FK De Mars à décembre 2005, sous-cultivés sur des plaques de gélose sanguine (BA) et de MSA, puis testés pour la sensibilité à l’aide de cartes GPS-61 sur un instrument Vitek-2. Les profils de sensibilité ont ensuite été comparés pour tout résultat divergent., Selon le protocole de laboratoire de routine, ces organismes ont également été testés par diffusion sur disque sur une plaque de gélose Mueller-Hinton de 100 mm pour la sensibilité aux antibiotiques suivants: céfoxitine (comme confirmation de la résistance à l’oxacilline), triméthoprime-sulfaméthoxazole (car il n’est pas inclus dans la batterie d’antimicrobiens sur la carte GPS-61), clindamycine et érythromycine (pour la détermination de la résistance inductible à la clindamycine), et vancomycine (pour résistance à la vancomycine).,
en outre, les plus récents rapports de culture respiratoire pour tous les patients atteints de mucoviscidose dont les échantillons ont été soumis en 2005 ont été examinés. Cet examen a été effectué afin de déterminer la fréquence à laquelle les colonies jaunes détectées sur la plaque MSA ont été définitivement identifiées comme S. aureus.
quatre-vingt-dix-sept pour cent des 69 isolats de S. aureus résistants à l’oxacilline et 31 isolats de S. aureus sensibles à l’oxacilline récupérés chez des patients atteints de mucoviscidose ont montré un accord exact avec les interprétations de sensibilité, qu’ils aient été prélevés dans le milieu MSA ou BA., Seulement trois écarts ont été notés lors de la comparaison des résultats des tests de sensibilité obtenus avec des plaques MSA ou BA.
deux isolats présentaient des résultats divergents concernant l’érythromycine. Dans un cas, l’isolat testé à partir de la plaque BA était résistant pendant le test Intermédiaire à partir de la plaque MSA; dans le second cas, l’inverse a été observé (érythromycine intermédiaire sur la plaque BA et érythromycine résistante sur la plaque MSA)., Dans le troisième et dernier cas, le résultat divergent était avec la clindamycine; dans ce cas, l’isolat était résistant à la clindamycine lorsqu’il était testé à partir de la plaque BA et intermédiaire lorsqu’il était testé à partir de la plaque MSA. Les trois isolats ont été positifs au Test D et auraient donc été déclarés résistants à la clindamycine et à l’érythromycine sur la base du test D de diffusion sur disque., Tous les autres antimicrobiens, dont l’ampicilline-sulbactam, le chloramphénicol, la gentamicine, la quinupristine-dalfopristine (Synercid), la rifampine, l’oxacilline, la céfazoline, le linézolide et la vancomycine, ont montré les mêmes résultats sur la carte GP-61 Vitek-2, quel que soit le milieu utilisé pour le test.
Les rapports de culture les plus récents pour tous les patients atteints de mucoviscidose dont les échantillons ont été soumis en 2005 (un seul rapport par patient a été examiné afin d’exclure les doublons au cours de l’année) ont été examinés afin de déterminer si les colonies jaunes observées sur les plaques MSA étaient en fait des isolats de S. aureus., Deux cent sept rapports ont été examinés, et il a été constaté que dans >98% des cas, si des colonies jaunes ont été trouvées à des quantités de >1+ (1+ est défini comme la croissance seulement dans le premier quadrant de stries) sur la plaque MSA, l’organisme a finalement été identifié comme étant S. aureus après avoir été sous-cultivé sur une plaque BA et testé par des méthodes de laboratoire de routine (un test de coagulase de diapositives a suivi par un test de coagulase en tube si nécessaire).
Le MSA est utilisé depuis de nombreuses années comme milieu sélectif et différentiel pour l’isolement du S., aureus et a longtemps été recommandé comme l’un des milieux sélectifs à utiliser avec les échantillons respiratoires des patients atteints de mucoviscidose (4). Récemment, une nouvelle gélose sélective, CHROMagar Staph aureus, s’est également révélée utile pour une utilisation sélective et différentielle avec des isolats de S. aureus (2, 4). Flayhart et coll. (2) ont indiqué que L’identification de S. aureus pourrait être signalée à partir de ce milieu sans tests supplémentaires avec une spécificité de 100%, dépassant l’exigence de précision de 95% du CLSI (anciennement NCCLS) M35-un document destiné à être utilisé comme test rapide unique acceptable pour l’identification des organismes (2, 5)., En ce qui concerne cette déclaration de L’étude de Flayhart et ses collègues, un récent Cumitech rédigé par Gilligan et al. (4) déclare qu ‘ « il est très probable que des résultats similaires seraient obtenus avec MSA mais que l’évaluation n’a pas été faite récemment. »Plus de 200 rapports de patients ont été examinés dans la présente étude pour évaluer la performance de MSA pour la détection de S. aureus à partir de cultures respiratoires de la FC, et l’examen a montré que MSA peut également identifier avec précision S., aureus (>98%) si la réaction chromogène appropriée a lieu et qu’il y a un>1+ niveau de colonies jaunes appropriées isolées sur le milieu. Rarement, des colonies jaunes en quantités ≤1+ ont été identifiées comme des staphylocoques à coagulase négative ou des espèces de Corynebacterium. Si des colonies jaunes sont cultivées sur MSA en quantités ≤1+ ou si un mélange d’organismes est cultivé, il faut procéder à des procédures d’isolement et d’identification de routine pour exclure la présence de S. aureus dans ces cultures.,
la capacité d’effectuer des tests de sensibilité précis dans un instrument Vitek-2 avec des isolats prélevés directement sur des plaques MSA a également été évaluée. Un accord a été obtenu pour 97% des isolats, avec seulement trois isolats divergents notés et avec un seul antibiotique par isolat en question. Ces trois organismes ont montré des écarts dans la sensibilité à l’érythromycine (2 isolats) ou à la clindamycine (1 isolat), et aucune différence n’a été notée pour déterminer la présence d’une résistance à l’oxacilline (69 isolats) ou d’une sensibilité à l’oxacilline (31 isolats). Étant donné que toutes nos S., les isolats d’aureus ont également été testés pour la présence de résistance inductible à la clindamycine avec le test D, les isolats ont été correctement déclarés comme résistants à la clindamycine et à l’érythromycine, car les trois organismes divergents étaient positifs au test D. Ceci est similaire aux rapports de résultats précis de susceptibilité de l’évaluation de l’utilisation de colonies directement à partir du milieu CHROMagar Staph aureus réalisée par Flayhart et ses collègues (2).
en conclusion, bien que L’étude isole de S., aureus ont été subculturés sur des plaques MSA et BA avant d’être testés pour la sensibilité, on pourrait raisonnablement résumer à partir de ces résultats que les tests de sensibilité de colonies convenablement pures, isolées et incubées directement à partir de MSA inoculés avec des échantillons pourraient être réalisés avec une certitude similaire sans la nécessité d’une sous-culture sur un Des études prospectives supplémentaires utilisant des échantillons cliniques sont nécessaires pour valider ces résultats., En outre, les organismes présentant les colonies jaunes caractéristiques sur les plaques MSA à des quantités de>1+ peuvent être signalés comme S. aureus sans autre test d’identification, avec>98% de confiance. Ces méthodes peuvent non seulement réduire le temps nécessaire pour la détection et les tests de sensibilité de S. aureus pour cette population de patients, mais aussi réduire les coûts pour le laboratoire grâce à l’élimination de certains milieux de sous-culture et des réactifs d’identification actuellement utilisés dans la déclaration de S. aureus à partir d’échantillons de FC., De plus, en utilisant le MSA à son potentiel maximal en ce qui concerne les cultures respiratoires de la FC, il n’est pas nécessaire d’ajouter des milieux sélectifs plus récents et plus coûteux.