SÄUREFESTE
Säurefeste Flecken sind ein Differentialfleck zur Identifizierung säurefester Organismen wie Mitglieder der Gattung Mycobacterium. Säurefeste Organismen zeichnen sich durch wachsartige, fast undurchlässige Zellwände aus; Sie enthalten Mykolsäure und große Mengen an Fettsäuren, Wachsen und komplexen Lipiden. Diese Art von Zellwand ist gegen die meisten Verbindungen resistent, daher erfordern säurefeste Organismen eine spezielle Färbetechnik.,
Der primäre Fleck, der bei säurefesten Färbungen verwendet wird, Carbol Fuchsin, ist lipidlöslich und enthält Phenol, das dem Fleck hilft, in die Zellwand einzudringen. Dies wird weiter durch die Zugabe von Wärme in Form von Wärme (Dampf) unterstützt. Dampf hilft, die Wachsschicht zu lockern und fördert den Eintritt des Primärflecks in die Zelle. Der Abstrich wird dann mit einem sehr starken Entfärbungsmittel gespült, das den Fleck von allen nicht säurefesten Zellen entfernt, aber die Zellwand von säurefesten Organismen nicht durchdringt., Die entfärbten nicht säurefesten Zellen nehmen dann den Gegenstrich auf, der in unserem Fall Methylenblau ist.
1. Bereiten Sie paarweise DREI Folien wie unten angegeben vor (2 für die Sicherung und eine zum Färben).
2. Beschriften Sie jede Folie und zeichnen Sie mit einem Wachsstift einen Kreis in die Mitte der Folie.
3. Bereiten Sie auf jeder Folie eine Emulsion mit 4 Loopfuls Staphylococcus epidermidis aus Ihrer Brühkultur auf die Folie vor (dies sind Ihre säurefesten negativen Bakterien).
4., Fügen Sie dann einen Schluck Mycobacterium chelonae hinzu (dies sind Ihre säurefesten positiven Bakterien) und mischen Sie die beiden Bakterien miteinander.
5. Lassen Sie die Rutschen an der Luft trocknen (während diese Rutschen trocknen, bereiten Sie Ihre Rutschen auf den Sporenfleck vor).
6. Sobald die Flüssigkeit vollständig verdunstet ist, erhitzen Sie die Bakterien, indem Sie sie dreimal durch Ihre Flamme leiten.
7. Stellen Sie sicher, dass das Schieberegal oben auf Ihrem Becher vollständig eben ist. Dann bringen Sie Ihr Wasser zum Kochen, während die Rutschen trocknen.
Sie benötigen nur etwa 200 Milliliter Wasser., Wenn Sie mehr hinzufügen, werden Sie die ganze Zeit warten, bis Ihr Wasser kocht.
8. Sobald das Wasser kocht, legen Sie Ihre Rutsche auf den Schieberegler über dem kochenden Wasser.
9. Decken Sie den Bereich Ihres Abstrichs auf der Folie mit einem quadratischen Stück vorgefertigtem Papiertuch ab. Stellen Sie sicher, dass kein Papier von der Folie hängt.
10. Tragen Sie den CARBOL FUCHSIN Fleck vorsichtig auf das Papiertuch auf.
Wenn ein Fleck in dem Wasser erscheint, das Sie kochen, stoppen Sie bitte und entsorgen Sie das gefärbte Wasser in der flüssigen Abfallentsorgung. Die Dämpfe aus Carbol Fuchsin können giftig sein.
11., Dampf mit dem Fleck auf dem Objektträger für 7 Minuten, während kontinuierlich mehr Fleck auftragen, so dass das Papierquadrat nie austrocknet.
12. Entfernen Sie das Papier vorsichtig mit einer Pinzette und entsorgen Sie es in dem kleinen Altpapierbecher, der auf Ihrer Bank bereitgestellt wird. Spülen Sie dann die Folie mit Wasser ab.
13. Legen Sie die Folie auf Ihr Färbebecken und spülen Sie sie vorsichtig mit Wasser ab.
14. Entfärben Sie mit 6 Tropfen saurem Alkohol (nicht Ethanol aus Ihrem Gram Stain Kit) und spülen Sie ihn dann mit Wasser ab.
15. Counterstain mit Methylenblau für 2 Minuten.
16., Spülen sie mit wasser und tupfen trocken mit bibulous papier (verwenden sie nicht die rutsche wärmer).
17. Untersuchen Sie unter der 100-fachen Objektivlinse mit Öl Immersion und notieren Sie Ihre Ergebnisse.
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