Enligt en rapport från the Cystic Fibrosis Foundation 2005, Staphylococcus aureus är återhämtade sig väldigt ofta från luftvägarna av cystisk fibros (CF) patienter (i genomsnitt ∼52% av patienterna ) och är en av de första patogener återhämtat sig från spädbarn och barn som lider av CF (1, 3)., De metoder som används för att upptäcka och identifiera denna organism i tid och för att producera exakta mottaglighetsmönster är viktiga för kritisk vård av och resultat för CF-patienter.
de laboratorier som utför respiratoriska kulturer för CF-patienter är väl medvetna om den tid som krävs för att utesluta eller utesluta patogener och tillhandahålla lämpliga mottaglighetsdata för dessa patogener. S. aureus är bara en av flera patogener som anses vara avgörande för detektion i denna patientpopulation; andra inkluderar Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia och related spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae och Streptococcus pneumoniae, liksom bakterier och virus. Eftersom kulturer som utförs på prover som samlats in från CF-patienter är arbetsintensiva och involverar användningen av många medeltyper, används selektiva medier ofta. Dessa medier minimerar tillväxten av normal flora och tillåter potentiella patogener att återvinnas lättare från den komplexa mikrofloran hos dessa respiratoriska prover., En av dessa selektiva medier är mannitol salt agar (MSA), som används för selektivt och differentiellt återvinna isolat av S. aureus (som kommer att visas gul på denna agar; koagulasnegativa stafylokocker kommer att förbli färgen på agar). Icke-selektiva / icke-differentiella medier rekommenderas för närvarande för användning vid identifieringsmetoder för S. aureus och förberedelse av suspensioner för användning vid känslighetstestning på ett Vitek-2-instrument. För att minska tiden och kostnaden i samband med identifiering och mottaglighetstestning av S., aureus från respiratoriska kulturer från CF-patienter, denna studie gjordes för att avgöra om MSA kunde användas för definitiv identifiering samt för att förbereda suspensioner för känslighetstestning i Vitek-2-systemet.
(en del av detta arbete publicerades tidigare .)
hundra isolat av S. aureus, varav 69 var oxacillinresistenta S. aureus och 31 av dessa var oxacillinkänsliga S., aureus, har återhämtat sig från CF-patienter från Mars till December 2005, subkultiverades på både blod-agar (BA) och MSA-plattor, och sedan testas för känslighet med hjälp av GPS-61 kort på en Vitek-2 instrument. Känslighetsmönster jämfördes sedan för eventuella diskrepanta resultat., Enligt rutin laboratorieprotokoll testades dessa organismer också genom diskdiffusion på en 100 mm Mueller-Hinton-agarplatta för mottaglighet för följande antibiotika: cefoxitin (som en bekräftelse på oxacillinresistens), trimetoprim-sulfametoxazol (eftersom det inte ingår i batteriet av antimikrobiella medel på GPS-61-kortet), klindamycin och erytromycin (för bestämning av inducerbar klindamycinresistens) och vankomycin (som en kontroll för en film av tillväxt upp till kanten av skivan som en indikation på möjlig vankomycin resistens).,
dessutom granskades de senaste respiratoriska odlingsrapporterna för alla CF-patienter med prover som lämnades in under 2005. Denna översyn utfördes för att bestämma hur ofta gula kolonier som detekterades på MSA-plattan definitivt identifierades som S. aureus.
nittiofem procent av de 69 oxacillinresistenta och 31 oxacillinkänsliga S. aureus-isolaten återhämtade sig från CF-patienter visade exakt överenskommelse med mottaglighetstolkningar, oavsett om de togs från MSA eller BA-mediet., Endast tre avvikelser noterades vid jämförelse av resultaten från känslighetstestning som erhållits med MSA-eller BA-plattor.
två isolat hade avvikande resultat avseende erytromycin. I ett fall var isolatet som testades från BA-plattan resistent medan man testade mellanliggande från MSA-plattan; i det andra fallet sågs omvänden (erytromycin mellanliggande på BA-plattan och erytromycinresistent på MSA-plattan)., I det tredje och sista fallet var diskrepansresultatet med klindamycin; i detta fall var isolatet resistent mot klindamycin när det testades från BA-plattan och mellanliggande när det testades från MSA-plattan. Alla tre isolaten var d-test positiva och skulle därför ha rapporterats som klindamycin och erytromycinresistent baserat på diskdiffusion D-testet., Alla andra antimikrobiella medel, som ingår ampicillin-sulbaktam, kloramfenikol, gentamicin, quinupristin-dalfopristin (Synercid), rifampicin, oxacillin, cefazolin, linezolid, och vankomycin, visade samma resultat på GP-61 Vitek-2 kort, oavsett vilket medium som användes för att testa.
de senaste kulturrapporterna för alla CF-patienter med prover som lämnades in under 2005 (endast en rapport per patient granskades för att utesluta dubbletter inom årets tid) granskades för att avgöra om gula kolonier som sågs på MSA-plattor faktiskt var isolat av S. aureus., Tvåhundra sju rapporter granskades, och det konstaterades att i >98% av fallen, om gula kolonier hittades i mängder av >1+ (1+ definieras som tillväxt endast i den första kvadranten av strimmor) på MSA-plattan, identifierades organismen slutligen som S. aureus efter att ha blivit subkulturerad på en BA-platta och testades med rutinmässiga laboratoriemetoder (ett glidkoagulastest följt av ett rörkoagulastest vid behov).. – herr talman!
MSA har använts i många år som ett selektivt, differentiellt medium för isolering av S., aureus och har länge rekommenderats som ett av de selektiva medierna för användning med CF-patienters respiratoriska prover (4). Nyligen rapporterades en ny selektiv agar, CHROMagar Staph aureus, också vara användbar för selektiv och differentiell användning med S. aureus isolat (2, 4). Flayhart et al. (2) rapporterade att identifieringen av S. aureus kunde rapporteras från detta medium utan ytterligare testning med 100% specificitet, vilket överstiger 95% noggrannhetskravet för CLSI (tidigare nccls) M35-ett dokument för användning som ett acceptabelt snabbtest för identifiering av organismer (2, 5)., Med beaktande av detta uttalande från studien av Flayhart och kollegor, en nyligen Cumitech författad av Gilligan et al. (4) anges att ”det är mycket troligt att liknande resultat skulle uppnås med MSA men att utvärderingen inte har gjorts nyligen.”Över 200 patientrapporter granskades i denna studie för att utvärdera MSA: s prestanda för detektering av S. aureus från CF respiratoriska kulturer, och översynen visade att MSA också kan identifiera S., aureus (>98%) om den korrekta kromogena reaktionen äger rum och det finns en >1+ nivå av lämpliga gula kolonier isolerade på mediet. Sällan identifierades gula kolonier i mängder ≤1+ som antingen koagulasnegativa stafylokocker eller Corynebacterium-arter. Om gula kolonier odlas på MSA i mängder ≤1 + eller om en blandning av organismer odlas, bör man fortsätta med rutinmässiga isolerings-och identifieringsförfaranden för att utesluta förekomsten av S. aureus i dessa kulturer.,
möjligheten att utföra noggrann känslighetstestning i ett Vitek-2-instrument med isolat som tagits direkt från MSA-plattor bedömdes också. Enighet uppnåddes för 97% av isolaten, med endast tre diskrepansisolat noterade och med endast ett antibiotikum per isolat i fråga. Dessa tre organismer visade avvikelser i antingen erytromycin (2 isolat) eller klindamycin (1 isolat) mottaglighet, och inga skillnader noterades för att bestämma närvaron av oxacillinresistens (69 isolat) eller oxacillin mottaglighet (31 isolat). Eftersom alla våra S., aureus-isolat testades också för förekomst av inducerbar klindamycinresistens med D-testet, isolaten rapporterades korrekt som resistenta mot både klindamycin och erytromycin, eftersom alla tre avvikande organismer var d-testpositiva. Detta liknar rapporter om exakta mottaglighetsresultat från utvärderingen av att använda kolonier direkt från CHROMagar Staph aureus medium som utförs av Flayhart och kollegor (2).
Sammanfattningsvis, även om studien isolat av S., aureus subkulturerades på MSA-och BA-plattor innan de testades för mottaglighet, man kunde rimligen sammanfatta från dessa fynd att mottaglighetstestning av lämpligt rena, isolerade och inkuberade kolonier direkt från MSA-inokulerade med exemplar kunde uppnås med liknande säkerhet utan att det behövs subkultur på ett icke-selektivt medium före testning. Ytterligare prospektiva studier som använder kliniska prover krävs för att validera dessa fynd., Dessutom kan organismer som visar de karakteristiska gula kolonierna på MSA-plattor i mängder av >1+ rapporteras som S. aureus utan ytterligare identifieringstest, med >98% förtroende. Dessa metoder kan inte bara minska den tid som behövs för detektion och mottaglighetstestning av S. aureus för denna patientpopulation utan kan också minska kostnaderna för laboratoriet genom eliminering av vissa subkulturmedier och identifieringsreagenser som för närvarande används vid rapportering av S. aureus från CF-prover., Dessutom, genom att använda MSA till sin maximala potential när det gäller CF respiratoriska kulturer, finns det inget behov av tillägg av nyare, dyrare selektiva medier.