ÁCIDO-RÁPIDO
Ácido-rápido mancha é um diferencial mancha usado para identificar ácido-rápido organismos, tais como os membros do gênero Mycobacterium. Os organismos ácidos-rápidos são caracterizados por paredes celulares quase impermeáveis; eles contêm ácido micólico e grandes quantidades de ácidos graxos, ceras e lipídios complexos. Este tipo de parede celular é resistente à maioria dos compostos, portanto organismos ácidos-rápidos requerem uma técnica especial de coloração.,
a mancha primária utilizada na coloração ácido-rápida, carbol fuchsin, é lipossolúvel e contém fenol, o que ajuda a mancha a penetrar na parede celular. Isto é ainda auxiliado pela adição de calor sob a forma de calor (vapor). O vapor ajuda a soltar a camada cerosa e promove a entrada da mancha primária dentro da célula. O esfregaço é então enxaguado com um descolorizador muito forte, que tira a mancha de todas as células não ácido-rápidas, mas não permeia a parede celular de organismos ácido-rápidos., As células não-ácidas descolorizadas tomam a contrastain, que no nosso caso é azul de metileno.
1. Trabalhando em pares, preparar três lâminas como indicado abaixo (2 para apoio e um para manchar).2. Etiquetar cada slide e desenhar um círculo no centro do slide com um lápis de cera.3. Prepare uma emulsão em cada lâmina com 4 loopfuls de Staphylococcus epidermidis da sua cultura de caldo para o slide (estas serão as suas bactérias acid-fast negativo).4., Em seguida, adicione uma loopful de Mycobacterium chelonae (estas são suas bactérias acid fast positivo) e misture as duas bactérias juntas.5. Permitir que a(S) lâmina (s) secar (s) ao ar nos aquecedores (enquanto estas lâminas estão a secar, preparar as lâminas para a mancha de esporos).6. Uma vez que o líquido evaporou completamente, o calor fixa a bactéria, passando-a através da sua chama três vezes.7. Certifique-se de que o Suporte de slide em cima do seu copo está completamente nivelado. Em seguida, traga a sua água para ferver enquanto as lâminas estão secando.só precisa de cerca de 200 mililitros de água., Se você adicionar mais, você estará esperando todo o período do laboratório para a sua água ferver.
8. Uma vez que a água está fervendo, coloque o seu escorrega na prateleira sobre a água fervente.9. Cubra a área da sua mancha no escorrega com um pedaço quadrado de papel toalha pré-cortada. Certifica-te que nenhum papel está pendurado no escorrega.10. Aplique cuidadosamente a mancha de Fuchsin na toalha de papel.se aparecer uma mancha na água que está a ferver, por favor pare e elimine a água manchada na eliminação de resíduos líquidos. Os vapores do carbol fuchsin podem ser tóxicos.
11., Vapor com a mancha no escorrega por 7 minutos enquanto continuamente aplicar mais mancha para que o quadrado de papel nunca seca para fora.12. Retire suavemente o papel com fórceps e deite-o fora no pequeno copo de papel que será fornecido no seu banco. Em seguida, lave o escorrega com água.13. Coloque o escorrega na sua bacia de coloração e lave suavemente com água.14. Descolorizar com 6 gotas de álcool ácido (não etanol do seu kit de coloração gram), Em seguida, enxaguar com água.15. Contrastain com azul de metileno durante 2 minutos.16., Enxaguar com água e secar com papel bibulado (não utilizar o aquecedor de lâminas).17. Examine sob a lente 100X objectiva com imersão em óleo e registe os seus resultados.
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