według raportu Fundacji mukowiscydozy z 2005 r., Staphylococcus aureus jest bardzo często odzyskiwany z dróg oddechowych pacjentów z mukowiscydozą (CF) (średnio 52% pacjentów) i jest jednym z pierwszych patogenów odzyskiwanych od niemowląt i dzieci cierpiących na mukowiscydozę (1, 3)., Metody stosowane do wykrywania i identyfikacji tego organizmu w odpowiednim czasie oraz do wytworzenia dokładnych wzorców podatności są ważne dla krytycznej opieki i wyników dla pacjentów z mukowiscydozą.
te laboratoria, które wykonują posiewy oddechowe u pacjentów z mukowiscydozą, są w pełni świadome czasu niezbędnego do wykluczenia lub wykluczenia patogenów i dostarczenia odpowiednich danych dotyczących wrażliwości tych patogenów. S. aureus jest tylko jednym z kilku patogenów uznawanych za kluczowe dla wykrycia w tej populacji pacjentów; Inne to Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia i pokrewne spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae i Streptococcus pneumoniae, a także mycobacteria i wirusy. Ponieważ Kultury wykonywane na próbkach pobranych od pacjentów z mukowiscydozą są pracochłonne i wiążą się z wykorzystaniem wielu typów mediów, często wykorzystuje się Media selektywne. Media te minimalizują wzrost prawidłowej flory i umożliwiają łatwiejsze odzyskiwanie potencjalnych patogenów ze złożonej mikroflory tych okazów oddechowych., Jednym z tych selektywnych mediów jest agar soli mannitolu (MSA), który jest używany do selektywnego i różnicowo odzyskiwania izolatów S. aureus (które pojawią się żółte na tym agarze; gronkowce koagulazo-ujemne pozostanie kolor agaru). Jednakże, nieselektywne / niedifferential media są obecnie zalecane do stosowania w wykonywaniu metod identyfikacji S. aureus i przygotowanie zawiesin do stosowania w testach wrażliwości na instrumencie Vitek-2. W celu skrócenia czasu i kosztów związanych z identyfikacją i testami wrażliwości S., aureus z hodowli dróg oddechowych od pacjentów z CF, badanie to zostało podjęte w celu określenia, czy MSA może być stosowany do ostatecznej identyfikacji, jak również do przygotowania zawiesin do badania wrażliwości w systemie Vitek-2.
(część tej pracy była wcześniej publikowana .)
sto izolatów S. aureus, z których 69 było opornych na oksacylinę S. aureus, a 31 było wrażliwych na oksacylinę S., w okresie od marca do grudnia 2005 r. u pacjentów z mukowiscydozą wykryto aureus, następnie poddano go obróbce zarówno na agarze krwi (BA), jak i płytach MSA, a następnie zbadano podatność za pomocą kart GPS-61 na instrumencie Vitek-2. Następnie porównywano wzorce wrażliwości pod kątem jakichkolwiek rozbieżnych wyników., Zgodnie z rutynowym protokołem laboratoryjnym organizmy te były również badane przez dyfuzję dysku na 100-mm płytce agarowej Muellera-Hintona pod kątem podatności na następujące antybiotyki: cefoksytyna (jako potwierdzenie oporności na oksacylinę), trimetoprim-sulfametoksazol (ponieważ nie jest on zawarty w baterii środków przeciwdrobnoustrojowych na karcie GPS-61), klindamycyna i erytromycyna (w celu określenia indukowanej oporności na klindamycynę) i wankomycyna (w celu sprawdzenia filmu wzrostu do krawędzi dysku jako wskazania możliwej oporności na wankomycynę).,
Przegląd ten został przeprowadzony w celu określenia, jak często żółte kolonie wykryte na płytce MSA zostały ostatecznie zidentyfikowane jako S. aureus.
dziewięćdziesiąt siedem procent 69 opornych na oksacylinę i 31 wrażliwych na oksacylinę izolatów S. aureus odzyskanych od pacjentów z mukowiscydozą wykazało dokładną zgodność z interpretacjami podatności, niezależnie od tego, czy zostały one pobrane z pożywki MSA czy BA., Po porównaniu wyników badań wrażliwości z płytkami MSA lub BA stwierdzono tylko trzy rozbieżności.
dwa Izolaty miały rozbieżne wyniki dotyczące erytromycyny. W jednym przypadku izolat testowany z płytki BA był oporny podczas badania półproduktu z płytki MSA; w drugim przypadku zaobserwowano odwrotność (półprodukt erytromycyny na płytce BA i oporność erytromycyny na płytce MSA)., W trzecim i ostatnim przypadku wynik był rozbieżny z klindamycyną; w tym przypadku izolat był odporny na klindamycynę podczas testowania z płyty BA i pośredni podczas testowania z płyty MSA. Wszystkie trzy Izolaty były dodatnie w teście D i w związku z tym na podstawie testu dyfuzji dyskowej d stwierdzono, że są oporne na klindamycynę i erytromycynę., Wszystkie inne środki przeciwdrobnoustrojowe, które obejmowały ampicylinę-sulbaktam, chloramfenikol, gentamycynę, chinuprystynę-dalfoprystynę( Synercyd), ryfampicynę, oksacylinę,cefazolinę, linezolid i wankomycynę, wykazały takie same wyniki na karcie GP-61 Vitek-2, niezależnie od tego, które medium zostało użyte do badania.
najnowsze raporty dotyczące hodowli wszystkich pacjentów z mukowiscydozą z próbkami przedłożonymi w roku 2005 (tylko jeden raport na pacjenta został zweryfikowany w celu wykluczenia duplikatów w ciągu roku) zostały zweryfikowane w celu ustalenia, czy żółte kolonie widoczne na płytkach MSA były w rzeczywistości izolatami S. aureus., Przeanalizowano dwieście siedem raportów i stwierdzono, że w >98% przypadków, jeśli żółte kolonie zostały znalezione w ilościach >1+ (1+ jest definiowane jako wzrost tylko w pierwszym kwadrancie smug) na płytce MSA, to organizm został ostatecznie zidentyfikowany jako S. aureus po subkulturze na płytce BA i przetestowany rutynowymi metodami laboratoryjnymi (szkiełkowy test koagulazy).następnie w razie potrzeby wykonać test koagulazy w probówce).
MSA jest używany od wielu lat jako selektywne, różnicowe medium do izolacji S., aureus i od dawna jest zalecany jako jeden z selektywnych mediów do stosowania z próbkami oddechowymi pacjentów z CF (4). Niedawno, nowy selektywny agar, chromagar staph aureus, również donoszono być użyteczny dla selektywnego i różnicowego stosowania z izolatami S. aureus (2, 4). Flayhart et al. (2) poinformował, że identyfikacja S. aureus może być zgłoszona z tego pożywki bez dodatkowych badań o 100% swoistości, przekraczających Wymaganie dokładności 95% CLSI (dawniej NCCLS) M35-a document for use as a acceptable single rapid test for the identification of organizms (2, 5)., W odniesieniu do tego stwierdzenia z badania Flayhart i współpracowników, niedawny cumitech autorstwa Gilligan et al. (4) stwierdza, że ” jest bardzo prawdopodobne, że podobne wyniki zostaną uzyskane w przypadku MSA, ale ocena ta nie została ostatnio przeprowadzona.”W niniejszym badaniu poddano przeglądowi ponad 200 raportów pacjentów w celu oceny skuteczności MSA w wykrywaniu S. aureus z kultur oddechowych CF, a przegląd wykazał, że MSA może również dokładnie zidentyfikować S., aureus (>98%), jeśli zachodzi właściwa reakcja chromogenna i występuje >1+ poziom odpowiednich Kolonii żółtych wyizolowanych na pożywce. Rzadko kolonie żółte w ilości ≤1+ były identyfikowane jako gronkowce koagulazo-ujemne lub gatunki Corynebacterium. Jeśli żółte kolonie są uprawiane na MSA w ilościach ≤1+ lub jeśli uprawia się mieszaninę organizmów, należy przystąpić do rutynowych procedur izolacji i identyfikacji, aby wykluczyć obecność S. aureus w tych kulturach.,
oceniono również możliwość wykonywania dokładnych badań wrażliwości w przyrządzie Vitek-2 z izolatami pobranymi bezpośrednio z płyt MSA. Osiągnięto porozumienie w odniesieniu do 97% izolatów, przy czym odnotowano tylko trzy rozbieżne izolaty i tylko jeden antybiotyk na jeden izolat. Te trzy organizmy wykazywały odchylenia w wrażliwości na erytromycynę (2 Izolaty) lub klindamycynę (1 izolat) i nie stwierdzono rozbieżności w określaniu oporności na oksacylinę (69 izolatów) lub wrażliwości na oksacylinę (31 izolatów). Od wszystkich naszych S., Izolaty aureus były również badane na obecność indukowanej oporności na klindamycynę testem D, Izolaty zostały prawidłowo zgłoszone jako oporne zarówno na klindamycynę, jak i erytromycynę, ponieważ wszystkie trzy rozbieżne organizmy były dodatnie w teście D. Jest to podobne do doniesień o dokładnych wynikach podatności z oceny wykorzystania Kolonii bezpośrednio z gronkowca CHROMagar aureus medium przeprowadzonej przez Flayharta i współpracowników (2).
podsumowując, chociaż badanie, aureus subculture na płytach MSA i BA przed badaniem podatności, można racjonalnie podsumować z tych ustaleń, że testowanie wrażliwości odpowiednio czystych, izolowanych i inkubowanych Kolonii bezpośrednio z MSA zaszczepionych okazami można osiągnąć z podobną pewnością bez potrzeby subkultury na nieselektywnym medium przed badaniem. Dodatkowe prospektywne badania z wykorzystaniem próbek klinicznych są wymagane do potwierdzenia tych wyników., Ponadto organizmy wykazujące charakterystyczne żółte kolonie na płytkach MSA w ilościach >1+ mogą być zgłaszane jako S. aureus bez dalszych badań identyfikacyjnych, z ufnością> 98%. Metody te nie tylko mogą skrócić czas potrzebny na wykrywanie i testowanie wrażliwości S. aureus dla tej populacji pacjentów, ale mogą również zmniejszyć koszty dla laboratorium poprzez eliminację niektórych subkultur mediów i odczynników identyfikacyjnych obecnie stosowanych w raportowaniu S. aureus z próbek CF., Dodatkowo, wykorzystując do maksimum potencjał MSA w odniesieniu do kultur oddechowych CF, nie ma potrzeby dodawania nowszych, droższych selektywnych mediów.