ACID-FAST

Acid-fast stain is een differentiële vlek die wordt gebruikt om zuur-fast organismen zoals leden van het geslacht Mycobacterium te identificeren. Zuur-snelle organismen worden gekenmerkt door was-achtige, bijna ondoordringbare celwanden; ze bevatten mycolzuur en grote hoeveelheden vetzuren, wassen en complexe lipiden. Dit type celwand is bestand tegen de meeste verbindingen, daarom zuur-snelle organismen vereisen een speciale kleuring techniek.,

de primaire kleuring die wordt gebruikt bij zuurvaste kleuring, carbol fuchsin, is oplosbaar in lipiden en bevat fenol, waardoor de kleuring in de celwand kan doordringen. Dit wordt verder ondersteund door de toevoeging van warmte in de vorm van warmte (stoom). Stoom helpt om de wasachtige laag los te maken en bevordert de binnenkomst van de primaire vlek in de cel. Het uitstrijkje wordt vervolgens gespoeld met een zeer sterke ontkleurder, die de vlek van alle niet-zuur-snelle cellen verwijdert, maar de celwand van zuur-snelle organismen niet doordringt., De ontkleurde niet-zuur-snelle cellen nemen dan de tegenstain op, die in ons geval methyleenblauw is.

1. Werk in paren en bereid drie dia ‘ s zoals hieronder aangegeven (2 voor back-up en een voor vlekken).

2. Label elke dia en teken een cirkel op het midden van de dia met een wax potlood.

3. Bereid op elke dia een emulsie met 4 loopfuls Staphylococcus epidermidis uit je bouillon cultuur op de dia (dit zullen je zuur-snelle negatieve bacteriën zijn).

4., Voeg dan een loopvol Mycobacterium chelonae (dit zijn je zuur snel positieve bacteriën) en meng de twee bacteriën samen.

5. Laat de dia (s) aan de lucht drogen op de dia warmers (terwijl deze dia ’s Drogen, bereid je dia’ s voor op de sporenvlek).

6. Zodra de vloeistof volledig is verdampt, verhit u de bacteriën door deze drie keer door uw vlam te laten gaan.

7. Zorg ervoor dat het schuiframe bovenop uw bekerglas volledig vlak is. Breng vervolgens het water aan de kook terwijl de glaasjes drogen.

u hebt slechts ongeveer 200 ml water nodig., Als u meer toevoegt, wacht u alle lab periode tot uw water kookt.

8. Zodra het water kookt, plaats je je glijbaan op het schuifrak boven het kokende water.

9. Bedek het gebied van uw uitstrijkje op de glijbaan met een vierkant stuk voorgesneden papieren handdoek. Zorg ervoor dat er geen papier van de dia hangt.

10. Breng de CARBOL Fuchsin vlek voorzichtig aan op de papieren handdoek.

als er een vlek optreedt in het water dat u kookt, stop dan en gooi het bevlekte water weg in het vloeibare afval. De dampen van carbol fuchsin kunnen giftig zijn.

11., Stoom met de vlek op de schuif gedurende 7 minuten terwijl u continu meer vlek aanbrengt, zodat het papier vierkant nooit uitdroogt.

12. Verwijder voorzichtig het papier met een pincet en gooi het weg in de kleine beker van oud papier die op uw bank zal worden verstrekt. Spoel vervolgens de glijbaan met water.

13. Zet de glijbaan op uw kleuring bassin en spoel voorzichtig met water.

14. Ontkleuren met 6 druppels zure alcohol (geen ethanol uit je gramkleurkit), daarna afspoelen met water.

15. Counterstain met methyleenblauw gedurende 2 minuten.

16., Spoel af met water en dep droog met bibulous papier (Gebruik de dia warmer niet).

17. Onderzoek onder de 100x objectief lens met olie onderdompeling en registreer uw resultaten.

de kleuren van deze afbeelding kunnen enigszins afwijken door Afdrukken/Kopiëren.