ACID-FAST
Acid-fast stain es una tinción diferencial utilizada para identificar organismos ácido-rápidos como los miembros del género Mycobacterium. Los organismos ácido-rápidos se caracterizan por paredes celulares casi impermeables, similares a la cera; contienen ácido micólico y grandes cantidades de ácidos grasos, ceras y lípidos complejos. Este tipo de pared celular es resistente a la mayoría de los compuestos, por lo tanto, los organismos ácido-rápidos requieren una técnica de tinción especial.,
la tinción primaria utilizada en tinción ácido-rápida, carbol fuchsina, es liposoluble y contiene fenol, que ayuda a la tinción a penetrar en la pared celular. Esto es ayudado además por la adición de calor en forma de calor (vapor). El vapor ayuda a aflojar la capa cerosa y promueve la entrada de la mancha primaria dentro de la célula. El frotis luego se enjuaga con un decolorante muy fuerte, que elimina la mancha de todas las células no ácidas, pero no penetra la pared celular de los organismos ácidos rápidos., Las células decoloradas no ácidas y rápidas luego toman la contra-tintura, que en nuestro caso es azul de metileno.
1. Trabajando en pares, prepare tres portaobjetos como se indica a continuación (2 para el respaldo y uno para teñir).
2. Etiquete cada diapositiva y dibuje un círculo en el Centro de la diapositiva con un lápiz de cera.
3. Prepare una emulsión en cada portaobjetos con 4 loopfuls de Staphylococcus epidermidis de su cultivo de caldo en el portaobjetos (estas serán sus bacterias negativas ácidas rápidas).
4., Luego, agregue un bucle de Mycobacterium chelonae (estas son sus bacterias acid fast positive) y mezcle las dos bacterias juntas.
5. Deje que los portaobjetos se sequen al aire en los calentadores de portaobjetos (mientras estos portaobjetos se secan, prepare los portaobjetos para la mancha de esporas).
6. Una vez que el líquido se haya evaporado por completo, el calor fija las bacterias pasándolas a través de la llama tres veces.
7. Asegúrese de que el portaobjetos en la parte superior de su vaso de precipitados esté completamente nivelado. Luego, lleva el agua a ebullición mientras los portaobjetos se secan.
solo necesita unos 200 mililitros de agua., Si agrega más, estará esperando todo el período de laboratorio para que el agua hierva.
8. Una vez que el agua esté hirviendo, coloque el portaobjetos sobre el portaobjetos por encima del agua hirviendo.
9. Cubra el área de su frotis en la diapositiva con un pedazo cuadrado de toalla de papel precortada. Asegúrese de que ninguno de los papeles está colgando de la diapositiva.
10. Aplique cuidadosamente la mancha de fucsina de CARBOL a la toalla de papel.
si aparece una mancha en el agua que está hirviendo, deténgase y deseche el agua manchada en la eliminación de residuos líquidos. Los vapores de la fucsina de carbol pueden ser tóxicos.
11., Vapor con la mancha en el portaobjetos durante 7 minutos mientras se aplica continuamente más mancha para que el cuadrado de papel nunca se seque.
12. Retire suavemente el papel con fórceps y deséchelo en el pequeño vaso de papel usado que se proporcionará en su banco. Luego, enjuague el portaobjetos con agua.
13. Coloque el portaobjetos en su cubeta de tinción y enjuague suavemente con agua.
14. Decolore con 6 gotas de alcohol ácido (no etanol de su kit de tinción de gram), luego enjuague con agua.
15. Coloración con azul de metileno durante 2 minutos.
16., Enjuague con agua y seque con papel absorbente (no utilice el calentador de portaobjetos).
17. Examine bajo la lente del objetivo 100X con inmersión en aceite y registre sus resultados.
los colores de esta imagen pueden estar ligeramente apagados debido a la impresión / copia.