ACID-FAST
Acid-fast stain è una macchia differenziale utilizzata per identificare gli organismi acido-veloci come i membri del genere Mycobacterium. Gli organismi acido-veloci sono caratterizzati da pareti cellulari simili a cera, quasi impermeabili; contengono acido micolico e grandi quantità di acidi grassi, cere e lipidi complessi. Questo tipo di parete cellulare è resistente alla maggior parte dei composti, quindi gli organismi acido-veloci richiedono una speciale tecnica di colorazione.,
La macchia primaria utilizzata nella colorazione acido-veloce, carbol fuchsin, è liposolubile e contiene fenolo, che aiuta la macchia a penetrare nella parete cellulare. Ciò è ulteriormente assistito dall’aggiunta di calore sotto forma di calore (vapore). Il vapore aiuta a sciogliere lo strato ceroso e favorisce l’ingresso della macchia primaria all’interno della cellula. Lo striscio viene quindi risciacquato con un decolorante molto forte, che rimuove la macchia da tutte le cellule non acido-veloci ma non permea la parete cellulare degli organismi acido-veloci., Le cellule non acido-veloci decolorate quindi occupano la controstintura, che nel nostro caso è blu di metilene.
1. Lavorando in coppia, preparare TRE diapositive come indicato di seguito (2 per il backup e uno per macchiare).
2. Etichetta ogni diapositiva e disegna un cerchio al centro della diapositiva con una matita di cera.
3. Preparare un’emulsione su ogni vetrino con 4 cicli di Staphylococcus epidermidis dalla coltura del brodo sul vetrino (questi saranno i batteri negativi acido-veloci).
4., Quindi, aggiungere un loopful di Mycobacterium chelonae (questi sono i batteri positivi acido veloce) e mescolare i due batteri insieme.
5. Lasciare asciugare all’aria i vetrini sui riscaldatori (mentre questi vetrini si asciugano, preparare i vetrini per la macchia di spore).
6. Una volta che il liquido è completamente evaporato, calore fissare i batteri facendolo passare attraverso la fiamma tre volte.
7. Assicurarsi che il rack di scorrimento sulla parte superiore del becher è completamente livello. Quindi, portare l’acqua a bollire mentre i vetrini si asciugano.
Hai solo bisogno di circa 200 millilitri di acqua., Se si aggiunge più, sarete in attesa di tutto il periodo di laboratorio per la vostra acqua a bollire.
8. Una volta che l’acqua sta bollendo, posizionare la diapositiva sul rack di scorrimento sopra l’acqua bollente.
9. Coprire l’area del tuo striscio sul vetrino con un pezzo quadrato di tovagliolo di carta PRETAGLIATO. Assicurarsi che nessuno della carta è appeso fuori il vetrino.
10. Applicare con cura la macchia CARBOL FUCHSIN sul tovagliolo di carta.
Se appare una macchia nell’acqua che stai bollendo, fermati e getta l’acqua macchiata nello smaltimento dei rifiuti liquidi. I fumi di carbol fuchsin possono essere tossici.
11., Vapore con la macchia sulla diapositiva per 7 minuti mentre si applica continuamente più macchia in modo che il quadrato di carta non si asciughi mai.
12. Rimuovere delicatamente la carta con una pinza e scartarla nel piccolo bicchiere di carta straccia che verrà fornito sulla panca. Quindi, sciacquare il vetrino con acqua.
13. Mettere la diapositiva sul bacino di colorazione e risciacquare delicatamente con acqua.
14. Decolorare con 6 gocce di alcol acido (non etanolo dal kit gram stain), quindi risciacquare con acqua.
15. Controstenere con blu di metilene per 2 minuti.
16., Risciacquare con acqua e asciugare con carta bibulous (non usare lo scaldaschiena).
17. Esaminare sotto la lente obiettivo 100X con immersione in olio e registrare i risultati.
I colori di questa immagine potrebbero essere leggermente spenti a causa della stampa / copia.