La coloration acido-rapide est une coloration différentielle utilisée pour identifier les organismes acido-rapides tels que les membres du genre Mycobacterium. Les organismes acido-rapides sont caractérisés par des parois cellulaires ressemblant à de la cire, presque imperméables; ils contiennent de l’acide mycolique et de grandes quantités d’acides gras, de cires et de lipides complexes. Ce type de paroi cellulaire est résistant à la plupart des composés, donc les organismes acido-rapides nécessitent une technique de coloration spéciale.,
la tache primaire utilisée dans la coloration acide-rapide, carbol fuchsine, est liposoluble et contient le phénol, qui aide la tache pénétrer la paroi cellulaire. Ceci est en outre aidé par l’ajout de chaleur sous forme de chaleur (vapeur). Vapeur aide à assouplir la couche cireuse et favorise l’entrée de la principale tache à l’intérieur de la cellule. Le frottis est ensuite rincé avec un décolorant très puissant, qui dépouille la tache de toutes les cellules non acides mais ne pénètre pas dans la paroi cellulaire des organismes acides., Les cellules décolorées Non acido-rapides prennent alors la contre-coloration, qui dans notre cas est le bleu de méthylène.
1. En travaillant par paires, préparez trois diapositives comme indiqué ci-dessous (2 pour la sauvegarde et une pour la coloration).
2. Étiquetez chaque diapositive et tracez un cercle au centre de la diapositive avec un crayon à cire.
3. Préparez une émulsion sur chaque diapositive avec 4 boucles de Staphylococcus epidermidis de votre culture de bouillon sur la diapositive (ce seront vos bactéries négatives acido-rapides).
4., Ensuite, ajoutez une boucle de Mycobacterium chelonae (ce sont vos bactéries positives acido-rapides) et mélangez les deux bactéries ensemble.
5. Laissez la ou les lames sécher à l’air sur les chauffe-lames(pendant que ces lames sèchent, préparez vos lames pour la tache de spores).
6. Une fois le liquide complètement évaporé, la chaleur fixe les bactéries en le faisant passer à travers votre flamme trois fois.
7. Assurez-vous que le Support coulissant sur le dessus de votre bécher est complètement de niveau. Ensuite, portez votre eau à ébullition pendant que les lames sèchent.
Vous n’avez besoin que d’environ 200 millilitres d’eau., Si vous en Ajoutez plus, vous attendrez toute la période de laboratoire pour que votre eau bout.
8. Une fois que l’eau est en ébullition, placez votre toboggan sur le porte-toboggan au-dessus de l’eau bouillante.
9. Couvrez la zone de votre frottis sur la diapositive avec un morceau carré de serviette en papier prédécoupé. Assurez-vous qu’aucun papier ne pend sur la diapositive.
10. Appliquez soigneusement la tache de fuchsine de CARBOL sur la serviette en papier.
Si une tache apparaît dans l’eau que vous faites bouillir, veuillez arrêter et jeter l’eau tachée dans l’élimination des déchets liquides. Les vapeurs de carbol fuchsine peuvent être toxiques.
11., Vaporiser avec la tache sur la lame pendant 7 minutes tout en appliquant continuellement plus de tache afin que le carré de papier ne sèche jamais.
12. Retirez délicatement le papier avec une pince et jetez-le dans la petite tasse de papier usagé qui sera fournie sur votre banc. Ensuite, rincez la lame avec de l’eau.
13. Placez la lame sur votre bassin de coloration et rincez doucement à l’eau.
14. Décolorer avec 6 gouttes d’alcool acide (pas d’éthanol de votre kit de teinture gram), puis rincer à l’eau.
15. Contre-coloration avec du bleu de méthylène pendant 2 minutes.
16., Rincer à l’eau et éponger avec du papier absorbant (ne pas utiliser le réchauffeur de diapositives).
17. Examinez sous l’objectif 100x avec immersion dans l’huile et enregistrez vos résultats.
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