Acid-FAST

Acid-fast stain är en differentiell fläck som används för att identifiera syra snabba organismer som medlemmar av släktet Mycobacterium. Syra-snabba organismer kännetecknas av vaxliknande, nästan ogenomträngliga cellväggar; de innehåller mykolsyra och stora mängder fettsyror, vaxer och komplexa lipider. Denna typ av cellvägg är resistent mot de flesta föreningar, därför kräver syrafasta organismer en speciell färgningsteknik.,

den primära fläcken som används vid syrafast färgning, karbol fuchsin, är lipidlöslig och innehåller fenol, vilket hjälper fläcken att tränga in i cellväggen. Detta bistås ytterligare av tillsats av värme i form av värme (ånga). Ånga hjälper till att lossa upp det vaxartade skiktet och främjar inmatning av den primära fläcken inuti cellen. Smeten sköljs sedan med en mycket stark avfärgningsmedel, som remsor fläcken från alla icke-syrafasta celler men genomtränger inte cellväggen av syrafasta organismer., De avkoloriserade icke-syra-snabba cellerna tar sedan upp motstaven, som i vårt fall är metylenblått.

1. Arbeta i par, Förbered tre glidbanor enligt anvisningarna nedan (2 för säkerhetskopiering och en att fläcka).

2. Märka varje bild och rita en cirkel i mitten av bilden med en vaxpenna.

3. Förbered en emulsion på varje glid med 4 loopfuls av Staphylococcus epidermidis från din buljongkultur på gliden (dessa kommer att vara dina syrafasta negativa bakterier).

4., Lägg sedan till en loopful av Mycobacterium chelonae (det här är dina sura snabba positiva bakterier) och blanda de två bakterierna tillsammans.

5. Låt sliden(s) lufttorka på glidvärmare (medan dessa diabilder torkar, förbereda dina diabilder för Sports fläcken).

6. När vätskan har avdunstat helt, värm fixa bakterierna genom att passera den genom din flamma tre gånger.

7. Se till att glidstället ovanpå bägaren är helt plant. Ta sedan med ditt vatten att koka medan glidbanorna torkar.

du behöver bara cirka 200 ml vatten., Om du lägger till mer, kommer du att vänta hela labbperioden för ditt vatten att koka.

8. När vattnet kokar, placera din bild på glidstället ovanför kokande vatten.

9. Täck området på ditt smet på bilden med en fyrkantig bit förskuren pappershandduk. Se till att inget av papperet hänger på bilden.

10. Applicera försiktigt CARBOL FUCHSIN-fläcken på pappershandduken.

om en fläck visas i det vatten du kokar, stoppa och kassera det färgade vattnet i det flytande avfallet. Ångorna från karbol fuchsin kan vara giftiga.

11., Ånga med fläcken på bilden i 7 minuter medan du kontinuerligt applicerar mer fläck så att papperstorget aldrig torkar ut.

12. Ta försiktigt bort papperet med tång och kassera det i den lilla papperskoppen som kommer att finnas på din bänk. Skölj sedan gliden med vatten.

13. Sätt gliden på ditt färgbassäng och skölj försiktigt med vatten.

14. Avfärga med 6 droppar syraalkohol (inte etanol från ditt gram-fläckkit) och skölj sedan med vatten.

15. Counterstain med metylenblått i 2 minuter.

16., Skölj med vatten och torka torrt med bibulous papper (använd inte glidvärmaren).

17. Undersök under 100X objektivlinsen med oljemänkning och registrera dina resultat.

färgerna på den här bilden kan vara lite av på grund av utskrift / kopiering.