ACID-FAST
Acid-fast stain jest różniczkową plamą używaną do identyfikacji organizmów szybko kwasowych, takich jak członkowie rodzaju Mycobacterium. Organizmy szybko kwaśne charakteryzują się woskowatymi, prawie nieprzepuszczalnymi ścianami komórkowymi; zawierają kwas mykolowy i duże ilości kwasów tłuszczowych, wosków i złożonych lipidów. Ten typ ściany komórkowej jest odporny na większość związków, dlatego organizmy kwasoodporne wymagają specjalnej techniki barwienia.,
podstawowa plama stosowana w barwie szybko kwasowej, karbol fuksyna, jest rozpuszczalna w lipidach i zawiera fenol, który pomaga plamie przeniknąć przez ścianę komórkową. Jest to dodatkowo wspomagane przez dodanie ciepła w postaci ciepła (pary). Para pomaga rozluźnić warstwę woskową i sprzyja wejściu pierwotnej plamy do wnętrza komórki. Rozmaz jest następnie spłukiwany bardzo silnym odbarwiaczem, który usuwa plamę ze wszystkich komórek szybko kwasowych, ale nie przenika przez ścianę komórkową organizmów szybko kwasowych., Odbarwione bezkwasowe komórki przejmują następnie warstwę przeciwstarzeniową, którą w naszym przypadku jest błękit metylenowy.
1. Pracując parami, przygotuj trzy szkiełka zgodnie z poniższymi wskazówkami (2 dla kopii zapasowej i jeden do plam).
2. Oznakuj każdy slajd i narysuj okrąg na środku slajdu ołówkiem woskowym.
3. Przygotuj emulsję na każdym szkiełku z 4 pętelkami Staphylococcus epidermidis z hodowli bulionowej na szkiełku(będą to twoje szybko działające bakterie ujemne).
4., Następnie dodaj jedną pętlę Mycobacterium chelonae (są to twoje bakterie szybko dodatnie) i wymieszaj obie bakterie razem.
5. Pozwól szkiełku wyschnąć na podgrzewaczach (podczas gdy te szkiełka wysychają, przygotuj szkiełka na plamę zarodników).
6. Gdy ciecz całkowicie odparuje, podgrzej bakterie, przepuszczając je przez płomień trzy razy.
7. Upewnij się, że stojak na zlewce jest całkowicie wyrównany. Następnie doprowadzić wodę do wrzenia podczas suszenia szkiełek.
potrzebujesz tylko około 200 mililitrów wody., Jeśli dodasz więcej, będziesz czekał cały okres laboratoryjny na zagotowanie wody.
8. Gdy woda się zagotuje, umieść suwak na stojaku nad wrzącą wodą.
9. Przykryj obszar rozmazu na szkiełku kwadratowym kawałkiem ręcznika papierowego. Upewnij się, że żaden papier nie zwisa ze zjeżdżalni.
10. Ostrożnie nałożyć plamę CARBOL FUCHSIN na ręcznik papierowy.
Jeśli w gotowanej wodzie pojawi się plama, zatrzymaj się i wyrzuć zabrudzoną wodę do pojemnika na odpady płynne. Opary z Carbol fuchsin mogą być toksyczne.
11., Paruj z plamą na szkiełku przez 7 minut, ciągle nakładając więcej plam, aby papier Nigdy nie wyschł.
12. Delikatnie wyjmij papier za pomocą kleszczy i wyrzuć go do małego kubka z makulatury, który zostanie dostarczony na ławce. Następnie przepłucz szkiełko wodą.
13. Umieść szkiełko na umywalce do barwienia i delikatnie spłucz wodą.
14. Odbarwić 6 kroplami kwaśnego alkoholu (nie etanolu z zestawu do plam gram), a następnie spłukać wodą.
15. Kontratakuj błękitem metylenowym przez 2 minuty.
16., Spłukać wodą i osuszyć papierem bibulous (nie używać podgrzewacza slajdów).
17. Zbadaj pod obiektywem 100x z zanurzeniem olejowym i zapisz swoje wyniki.
kolory tego obrazu mogą być nieco wyłączone z powodu drukowania / kopiowania.