Ifølge en rapport fra the Cystic Fibrosis Foundation i 2005, Staphylococcus aureus er gjenopprettet svært ofte fra luftveiene av cystisk fibrose (CF) pasienter (i gjennomsnitt, ∼52% av pasientene ) og er en av de første patogener utvinnes fra spedbarn og barn som lider av CF (1, 3)., Metodene som brukes til å oppdage og identifisere denne organismen på en riktig måte og til å produsere nøyaktige mottakelighet mønstre er viktig for den kritiske vare på og utfall for CF-pasienter.
De laboratoriene som utfører luftveier kulturer for CF-pasienter er vel klar over den tid som er nødvendig for å utelukke eller regel i patogener og gi riktig mottakelighet data for disse patogener. S. aureus er bare én blant flere patogener anses å være avgjørende for deteksjon i denne pasienten befolkningen, mens andre inkluderer Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia og relaterte spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae og Streptococcus pneumoniae, samt mykobakterier og virus. Siden kulturer utført på prøver samlet fra CF-pasienter er arbeidskrevende og innebærer bruk av mange middels typer, selektive medier er ofte benyttet. Disse mediene minimere veksten av normal flora og gjør det mulig for potensielle patogener å bli gjenvunnet mer lett fra kompleks mikroflora av disse respiratoriske prøver., En av disse selektive medier er mannitol salt agar (MSA), som brukes for selektivt og differentially utvinne isolater av S. aureus (som vil vises gult på dette agar; coagulase-negative stafylokokker vil forbli fargen på agar ). Imidlertid, ikke-selektive/nondifferential media er anbefalt for bruk i å utføre identifikasjon metoder for S. aureus og forbereder suspensjoner for bruk i resistenstesting på en Vitek-2 instrument. For å redusere tid og kostnader forbundet med identifikasjon og resistenstesting av S., aureus fra luftveiene kulturer fra CF-pasienter, denne studien ble gjennomført for å finne ut om MSA kan brukes for endelig identifikasjon, samt for å forberede suspensjoner for resistenstesting i Vitek-2-systemet.
(en Del av dette arbeidet ble publisert tidligere .)
Ett hundre isolater av S. aureus, 69 som ble oxacillin-resistent S. aureus og 31 som ble oxacillin-utsatt S., aureus, ble gjenopprettet fra CF-pasienter fra Mars til desember 2005, subcultured på både blod agar (BA) og MSA plater, og deretter testet for mottakelighet ved hjelp av GPS-61 kort på en Vitek-2 instrument. Mottakelighet mønstre ble deretter sammenlignet for alle motsigende resultater., Per laboratoriets rutinemessige protokollen, disse organismene ble også testet av disk diffusjon på en 100 mm Mueller-Hinton agar plate for mottakelighet for følgende antibiotika: cefoxitin (som en bekreftelse av oxacillin), trimetoprim-sulfamethoxazole (som det ikke er inkludert i batteriet av antimikrobielle midler på GPS-61-kort), klindamycin og erytromycin (for fastsettelse av inducible clindamycin motstand), og vankomycin (som en sjekk for en film av vekst opp til kanten av den disken som en indikasjon på mulig vancomycin-resistens).,
I tillegg, den siste delen av kultur-rapporter for alle CF-pasienter med prøvene som er sendt inn i år 2005 ble gjennomgått. Denne anmeldelsen ble utført for å finne ut hvor ofte gule kolonier oppdaget på MSA plate var definitivt identifisert som S. aureus.
Nitti-sju prosent av de 69 oxacillin-resistent og 31 oxacillin-utsatt S. aureus-isolater utvinnes fra CF-pasienter viste samsvar med mottakelighet tolkninger, om de ble tatt fra MSA, eller BA medium., Bare tre avvik ble notert ved sammenligning av resistenstesting resultatene som oppnås med MSA, eller BA plater.
To isolater hadde motsigende resultater om erytromycin. I ett tilfelle, isolere testet fra BA plate var motstandsdyktig mens testing mellomliggende fra MSA plate; i det andre tilfellet, kan det motsatte ble sett (erytromycin mellomliggende på BA plate og erytromycin motstandsdyktig på MSA plate)., I den tredje og siste tilfellet, motsigende resultatet var med clindamycin; i dette tilfellet, isolere var resistente mot clindamycin når testet fra BA plate og middels når testet fra MSA plate. Alle de tre isolatene var D-test positiv og derfor ville ha vært rapportert som klindamycin og erytromycin motstandsdyktig basert på disk diffusjon D test., Alle andre antimikrobielle midler, som inkluderte ampicillin-sulbactam, kloramfenikol, gentamicin, quinupristin-dalfopristin (Synercid), rifampicin, oxacillin, cefazolin, linezolid, og vankomycin, viste samme resultat på GP-61 Vitek-2-kortet, uavhengig av hvilket medium ble brukt til testing.
De nyeste kultur-rapporter for alle CF-pasienter med prøvene som er sendt inn i år 2005 (bare én rapport per pasient ble gjennomgått for å utelukke duplikater i år) ble gjennomgått for å finne ut om gule kolonier sett på MSA-plater ble faktisk isolater av S. aureus., To hundre og syv rapportene ble gjennomgått, og det ble funnet at i >98% av tilfellene, hvis gule kolonier ble det funnet mengder av >1+ (1+ er definert som vekst bare i første kvadrant av streker) på MSA-plate, deretter organismen ble til slutt identifisert som S. aureus etter å ha blitt subcultured på en BA plate og testet av laboratoriets rutinemessige metoder (et lysbilde coagulase-test etterfulgt av et rør coagulase-test-om nødvendig).
MSA har vært brukt i mange år som en selektiv, differensial medium for isolering av S., aureus og har lenge vært anbefalt som en av de selektive medier for bruk med CF pasienter’ respiratoriske prøver (4). Nylig, en ny selektiv agar, CHROMagar Staph aureus, ble også rapportert å være nyttig for selektiv og differensiert bruk med S. aureus-isolater (2, 4). Flayhart et al. (2) rapporterte at identifisering av S. aureus kunne bli rapportert fra dette medium, uten ytterligere testing med 100% spesifisitet, overstiger 95% nøyaktighet kravet til CLSI (tidligere NCCLS), M35-Et dokument for bruk som en akseptabel enkelt rask test for identifikasjon av organismer (2, 5)., Med hensyn til denne uttalelsen fra studiet av Flayhart og kolleger, en nylig Cumitech forfattet av Gilligan et al. (4) sier at «Det er svært sannsynlig at lignende resultater som ville oppnås med MSA, men at evalueringen ikke har nylig blitt gjort.»Over 200 pasienten rapportene ble gjennomgått i denne studien for å evaluere resultatene av MSA for påvisning av S. aureus fra JF. luftveier kulturer, og gjennomgangen viste at MSA kan også finne nøyaktig S., aureus (>98%) hvis riktig kromogene reaksjon finner sted, og det er en >1+ nivå av aktuelle gule kolonier isolert på medium. Sjelden, gule kolonier i mengder ≤1+ ble identifisert som enten coagulase-negative stafylokokker eller Corynebacterium arter. Hvis gule kolonier er dyrket på MSA i mengder ≤1+, eller hvis en blanding av organismer er voksen, så man bør gå videre med rutine isolering og identifikasjon prosedyrer for å utelukke tilstedeværelse av S. aureus i disse kulturene.,
evnen til å utføre nøyaktige resistenstesting i en Vitek-2-apparatet med isolater tatt direkte av MSA-plater ble også vurdert. Avtalen ble oppnådd for 97% av isolatene, med bare tre motsigende isolater merke til og med bare ett antibiotikum per isolere i spørsmålet. Disse tre organismer viste avvik i enten erytromycin (2 isolater) eller clindamycin (1 isolere) mottakelighet, og ingen avvik ble notert for å fastslå tilstedeværelse av oxacillin (69 isolater) eller oxacillin-følsomhet (31 isolater). Siden alle våre S., aureus-isolater ble også testet for tilstedeværelse av inducible clindamycin motstand med D-test, den isolerer var riktig rapportert som er resistente mot både klindamycin og erytromycin, som alle tre motsigende organismer ble D teste positivt. Dette er tilsvarende rapporter for nøyaktig mottakelighet resultater fra evalueringen av å utnytte kolonier direkte fra CHROMagar Staph aureus middels utført av Flayhart og kolleger (2).
I konklusjonen, selv om studien isolater av S., aureus ble subcultured på MSA, og BA plater før de blir testet for mottakelighet, en med rimelighet kunne oppsummere fra disse funnene at resistenstesting av riktig ren, isolert, og inkubert kolonier direkte fra MSA inokulert med prøver som kan oppnås med tilsvarende sikkerhet, uten behov for subkultur på en ikke-selektive mediet før testing. Flere prospektive studier utnytte kliniske prøver som er nødvendig for å bekrefte disse funnene., I tillegg organismer som viser karakteristiske gule kolonier på MSA plater på mengder av >1+ kan rapporteres som S. aureus uten ytterligere identifikasjon testing, med >98% sikkerhet. Disse metodene ikke bare kan redusere tiden som trengs for deteksjon og resistenstesting av S. aureus for denne pasienten befolkningen, men kan også redusere kostnader til laboratoriet gjennom eliminering av noen subkultur media og identifikasjon reagenser som brukes i rapportering av S. aureus fra CF-pasienter., I tillegg, i å utnytte MSA til sitt maksimale potensial angående JF luftveier kulturer, er det ikke behov for tillegg av nye, dyrere selektive medier.