Ifølge en rapport fra Cystisk Fibrose Foundation i 2005, Staphylococcus aureus er genvundet meget ofte fra luftvejene af cystisk fibrose (CF) patienter (gennemsnitligt, ∼52% af patienterne), og er en af de første patogener, der inddrives fra spædbørn og børn, der lider af CF (1, 3)., De metoder, der anvendes til at detektere og identificere denne organisme i tide og til at producere nøjagtige modtagelighed mønstre er vigtige for den kritiske pleje af og resultater for CF patienter.de laboratorier, der udfører respiratoriske kulturer for CF-patienter, er velbevidste om den tid, der er nødvendig for at udelukke eller udelukke patogener og give passende modtagelsesdata for disse patogener. S. aureus er kun en blandt flere patogener, der anses for at være afgørende for påvisning i denne patientpopulation; andre inkluderer Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia og beslægtet spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae, og Streptococcus pneumoniae, samt mykobakterier og vira. Da kulturer udført på prøver indsamlet fra CF-patienter er arbejdskrævende og involverer brugen af mange mellemtyper, selektive medier bruges ofte. Disse medier minimerer væksten af normal flora og tillader, at potentielle patogener lettere kan genvindes fra den komplekse mikroflora af disse åndedrætsprøver., En af disse selektive medier er mannitol salt agar (MSA), som bruges til selektivt og differentielt inddrive isolater af S. aureus (som vil blive vist i gult på denne agar; coagulase-negative stafylokokker vil forblive den farve af agar ). Imidlertid anbefales ikke-selektive/ikke-differentielle medier i øjeblikket til brug ved udførelse af identifikationsmetoder for S. aureus og forberedelse af suspensioner til brug ved følsomhedstest på et Vitek-2-instrument. For at reducere den tid og de omkostninger, der er forbundet med identifikation og følsomhedstest af S., aureus fra luftvejskulturer fra CF-patienter blev denne undersøgelse foretaget for at bestemme, om MSA kunne bruges til endelig identifikation såvel som til fremstilling af suspensioner til følsomhedstest i Vitek-2-systemet.
(en del af dette arbejde blev offentliggjort tidligere .)
hundrede isolater af S. aureus, hvoraf 69 var o ,acillinresistente S. aureus og 31 af dem var o S.acillin-modtagelige S., aureus, var kommet fra CF-patienter fra Marts til December 2005, subcultured på både blod agar (BA) og MSA-plader, og derefter testes for modtagelighed ved hjælp af GPS-61 kort på en Vitek-2 instrumentet. Følsomhedsmønstre blev derefter sammenlignet for eventuelle afvigende resultater., Per rutine laboratorium protokol, disse organismer blev også testet ved disken diffusion på en 100-mm-Mueller-Hinton agar plade til modtagelighed for den følgende antibiotika: cefoxitin (som en bekræftelse af oxacillin modstand), trimethoprim-sulfamethoxazol) (det er ikke inkluderet i batteriet af antimikrobielle midler på GPS-61-kort), clindamycin og erythromycin (til bestemmelse af inducible modstand clindamycin) og vancomycin (som en check til en film af vækst op til kanten af disken som en angivelse af mulige vancomycin modstand).,
derudover blev de seneste respiratoriske kulturrapporter for alle CF-patienter med prøver, der blev indsendt i år 2005, gennemgået. Denne gennemgang blev udført for at bestemme, hvor ofte gule kolonier, der blev påvist på MSA-pladen, definitivt blev identificeret som S. aureus.
Halvfems-syv procent af de 69 oxacillin-resistente og 31 oxacillin-følsomme S. aureus isolater, der inddrives fra CF-patienter viste en præcis aftale med modtagelighed fortolkninger, om de var taget fra MSA-eller BA medium., Der blev kun konstateret tre uoverensstemmelser ved sammenligning af følsomhedstestresultater opnået med MSA-eller BA-plader.
to isolater havde afvigende resultater med hensyn til erythromycin. I et tilfælde var isolatet testet fra BA-pladen resistent under test af mellemprodukt fra MSA-pladen; i det andet tilfælde blev det omvendte set (erythromycin-mellemprodukt på BA-plade og erythromycin-resistent på MSA-plade)., I det tredje og sidste tilfælde, Det uoverensstemmende resultat var med clindamycin; i dette tilfælde, isolatet var resistent over for clindamycin, når det blev testet fra BA-pladen og mellemliggende, når det blev testet fra MSA-pladen. Alle tre isolater var D-test positive og ville derfor være rapporteret som clindamycin og erythromycin resistente baseret på disk diffusion d test., Alle andre antimikrobielle stoffer, der indgår ampicillin-sulbactam, chloramphenicol, gentamicin, quinupristin-dalfopristin (Synercid), rifampin, oxacillin, cefazolin, linezolid, og vancomycin, viste de samme resultater på GP-61 Vitek-2 kort, uanset hvilket medium, der anvendes til test.
de seneste kulturrapporter for alle CF-patienter med prøver indsendt i 2005 (kun en rapport pr.patient blev gennemgået for at udelukke duplikater inden for årets tid) blev gennemgået for at afgøre, om gule kolonier set på MSA-plader faktisk var isolater af S. aureus., To hundrede syv rapporter er blevet gennemgået, og det blev konstateret, at i >98% af tilfældene, hvis gule kolonier, der blev fundet i mængder >1+ (1+ er defineret som væksten i første kvadrant af striber) på MSA-plade, så er den organisme, der i sidste ende blev identificeret som S. aureus efter at være blevet subcultured på en BA plade og testet af rutine laboratoriemetoder (en slide coagulase test efterfulgt af et rør coagulase-test, hvis det er nødvendigt).
MSA er blevet brugt i mange år som et selektivt, differentieret medium til isolering af S., aureus og er længe blevet anbefalet som et af de selektive medier til brug sammen med CF-patienters respiratoriske prøver (4). For nylig blev en ny selektiv agar, CHROMagar Staph aureus, også rapporteret at være nyttig til selektiv og differentieret anvendelse med S. aureus-isolater (2, 4). Flayhart et al. (2) rapporterede, at identifikation af S. aureus kunne blive rapporteret fra dette medie uden yderligere test med 100% specificitet, der overstiger 95% nøjagtighed krav i CLSI (tidligere NCCLS) – M35-Et dokument til brug som en acceptabel enkelt hurtig test til identifikation af mikroorganismer (2, 5)., Med hensyn til denne erklæring fra undersøgelsen af Flayhart og kolleger, en nylig cumitech forfatter af Gilligan et al. (4) siger, at “det er meget sandsynligt, at lignende resultater opnås med MSA, men at evalueringen ikke er blevet foretaget for nylig.”Over 200 patientrapporter blev gennemgået i den nuværende undersøgelse for at evaluere resultaterne af MSA til påvisning af S. aureus fra CF respiratoriske kulturer, og gennemgangen viste, at MSA også nøjagtigt kan identificere S., aureus (>98%), hvis den korrekte kromogene reaktion finder sted, og der er et >1+ niveau af passende gule kolonier isoleret på mediet. Sjældent blev gule kolonier i mængder på 1 1+ identificeret som enten koagulase-negative stafylokokker eller Corynebacterium-arter. Hvis gule kolonier dyrkes på MSA i mængder på 1 1+ eller hvis en blanding af organismer dyrkes, skal man fortsætte med rutinemæssige isolerings-og identifikationsprocedurer for at udelukke forekomsten af S. aureus i disse kulturer.,
evnen til at udføre nøjagtig følsomhedstest i et Vitek-2-instrument med isolater taget direkte fra MSA-plader blev også vurderet. Der blev opnået enighed for 97% af isolaterne, med kun tre uoverensstemmende isolater noteret og med kun et antibiotikum pr. Disse tre organismer viste afvigelser i enten erythromycin (2 isolater) eller clindamycin (1 isolat) modtagelighed, og der blev ikke observeret nogen uoverensstemmelser til bestemmelse af tilstedeværelsen af O .acillinresistens (69 isolater) eller O .acillinfølsomhed (31 isolater). Siden alle vores S., aureus-isolater blev også testet for tilstedeværelsen af inducerbar clindamycinresistens med D-testen, isolaterne blev korrekt rapporteret som resistente over for både clindamycin og erythromycin, da alle tre uoverensstemmende organismer var D-test positive. Dette svarer til rapporter om nøjagtige følsomhedsresultater fra evalueringen af udnyttelse af kolonier direkte fra CHROMagar Staph aureus medium udført af Flayhart og kolleger (2).
Som konklusion, selvom undersøgelsen isolerer af S., aureus blev subcultured på MSA og BA plader, inden de bliver testes for modtagelighed, kunne man med rimelighed kan sammenfatte disse resultater, at følsomhedstestning af passende ren, isolerede, og inkuberes kolonier direkte fra MSA, der blev podet med prøver, der kan opnås med tilsvarende sikkerhed, uden at det er nødvendigt for subkultur på en ikke-selektive medie inden testning. Yderligere prospektive undersøgelser, der anvender kliniske prøver, er nødvendige for at validere disse fund., Hertil kommer, at organismer, der viser de karakteristiske gule kolonier på MSA-plader i mængder >1+ kan rapporteres som S. aureus uden yderligere identifikation test, med >98% tillid. Disse metoder kun kan nedsætte nødvendige tid for opdagelse og følsomhedstestning af S. aureus for denne patient population, men kan også reducere omkostningerne til laboratoriet gennem afskaffelse af nogle subkultur medier og identifikation reagenser, der anvendes i indberetningen af S. aureus fra CF-prøver., Derudover, ved at udnytte MSA til sit maksimale potentiale med hensyn til CF respiratoriske kulturer, der er ikke behov for tilsætning af nyere, dyrere selektive medier.