Podle zprávy z Cystická Fibróza Nadace v roce 2005, Staphylococcus aureus, je zpět, velmi často z dýchacích cest cystické fibrózy (CF) u pacientů (v průměru ∼52% pacientů ) a je jedním z prvních patogeny zotavil ze kojenců a dětí trpících FS (1, 3)., Metody použité pro detekci a identifikaci tohoto organismu včas a produkovat přesné citlivosti vzory jsou důležité pro kritickou péči a výsledky pro CF pacienty.
laboratoře, které provádějí respirační kultury u pacientů s CF, si dobře uvědomují čas potřebný k vyloučení nebo pravidlu u patogenů a poskytují pro tyto patogeny vhodné údaje o citlivosti. S. aureus je jedním z několika patogeny považovány za rozhodující pro zjištění u této populace pacientů; mezi další patří Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia a související spp.,, Stenotrophomonas maltophilia, Achromobacter xylosoxidans, Haemophilus influenzae a Streptococcus pneumoniae, stejně jako mykobakterií a viry. Od kulturách provedených na vzorcích odebraných z CF pacientů jsou práce náročné a zahrnují použití mnoha středních typů, selektivní média jsou často využívána. Tato média minimalizují růst normální flóry a umožňují snadnější regeneraci potenciálních patogenů ze složité mikroflóry těchto respiračních vzorků., Jeden z těchto selektivní média je mannitol salt agar (MSA), která se používá pro selektivní a diferencovaně zotavuje izolátů S. aureus (který se objeví žluté na tomto agaru; koaguláza-negativní stafylokoky zůstane barva agar ). Neselektivní / nediferenciální média se však v současné době doporučují pro použití při provádění identifikačních metod pro s.aureus a při přípravě suspenzí pro použití při testování citlivosti na přístroji Vitek-2. S cílem snížit čas a náklady spojené s identifikací a testováním citlivosti s., aureus z dýchacích kultur z CF pacientů, tato studie byla provedena k určení, zda MSA může být použit pro definitivní identifikaci, stejně jako pro přípravu suspenze pro testování citlivosti v Vitek-2 systému.
(část této práce byla publikována dříve .)
sto izolátů s. aureus, z nichž 69 byly s. aureus rezistentní na oxacilin a 31 byly s., aureus, byly získány z CF pacientů od Března do prosince 2005, subcultured na krevní agar (BA) a MSA desky, a pak testovány na citlivost pomocí GPS-61 karty na Vítek-2 nástroje. Vzory citlivosti byly poté porovnány pro jakékoli nesrovnalosti., Za rutinní laboratorní protokol, tyto organismy byly také testovány disku difúze na 100-mm Mueller-Hinton agarem pro náchylnost k následující antibiotika: cefoxitin (jako potvrzení oxacilin odpor), trimethoprim-sulfamethoxazol (jak to není součástí baterie antimikrobiálních látek na GPS-61 karta), klindamycinu a erytromycinu (pro stanovení indukovatelných klindamycin odpor), a vancomycin (jako kontrola pro film růstu až k okraji disku jako indikace možných vankomycin odpor).,
kromě toho byly přezkoumány nejnovější zprávy o respirační kultuře u všech pacientů s CF se vzorky předloženými v roce 2005. Tento přezkum byl proveden za účelem zjištění, jak často byly žluté kolonie zjištěné na desce MSA definitivně identifikovány jako s.aureus.
Devadesát sedm procent z 69 oxacilin-rezistentní a 31 oxacilin citlivé izolátů S. aureus se zotavil z CF pacientů ukázala, přesné dohody s citlivostí interpretace, zda byly převzaty z MSA nebo BA médium., Při porovnání výsledků zkoušek citlivosti získaných s deskami MSA nebo BA byly zaznamenány pouze tři nesrovnalosti.
dva izoláty měly nesrovnalosti ohledně erythromycinu. V jednom případě byl izolát testovaný z BA desky odolný při testování meziproduktu z MSA desky; ve druhém případě byl pozorován opak (erythromycin intermediate na BA desce a erythromycin rezistentní na MSA desce)., V třetí a poslední případ, neshodné výsledek byl s klindamycin, v tomto případě, izolát byl rezistentní na clindamycin při zkoušce z BA talíř a meziprodukt při zkoušce z MSA desky. Všechny tři izoláty byly D test pozitivní, a proto by byly hlášeny jako klindamycin a erythromycin rezistentní založené na disku difúze D test., Všechny ostatní antimikrobiálních látek, které obsahovaly ampicilin-sulbactam, chloramfenikol, gentamicin, quinupristin-dalfopristin (Synercid), rifampin, oxacilin, cefazolin, linezolid a vankomycin, ukázal stejné výsledky na GP-61 Vítek-2 karty, bez ohledu na to, které médium bylo použito pro testování.
nejnovější kultury zprávy pro všechny CF pacientů s vzorků předložených v roce 2005 (pouze jedna zpráva za pacienta byla přezkoumána s cílem vyloučit duplicity v rámci roku je čas) byly přezkoumány určit, zda žluté kolonie je vidět na MSA desky byly ve skutečnosti izolátů S. aureus., Dvě stě sedm zpráv byly přezkoumány a bylo zjištěno, že v >98% případů, pokud žluté kolonie byly nalezeny v množství >1+ (1+ je definována jako růst pouze v prvním kvadrantu pruhování) na MSA deska, pak organismus byl nakonec identifikován jako S. aureus po subcultured na BA plechu a zkoušena přetlakem rutinní laboratorní metody (snímek koaguláza testu následuje trubice koaguláza test, pokud je to nutné).
MSA se používá po mnoho let jako selektivní, diferenciální médium pro izolaci s., aureus a již dlouho se doporučuje jako jedno ze selektivních médií pro použití s respiračními vzorky pacientů s CF (4). Nedávno byl také hlášen nový selektivní agar, chromagar Staph aureus, který je užitečný pro selektivní a diferenciální použití s izoláty s. aureus (2, 4). Flayhart et al. (2) uvádí, že identifikace S. aureus může být hlášena z tohoto média bez dalšího testování se 100% specificitou, přesahující 95% přesnost požadavky CLSI (dříve NCCLS) M35-dokument pro použití jako přijatelné jeden rychlý test pro identifikaci organismů (2, 5)., Pokud jde o toto prohlášení ze studie Flayharta a kolegů, nedávný Cumitech, jehož autorem je Gilligan et al. (4) uvádí, že „je velmi pravděpodobné, že podobné výsledky by byly získány u MSA, ale toto hodnocení nebylo nedávno provedeno.“Více než 200 pacientů byly přezkoumány zprávy v této studii se pro hodnocení výkonnosti MSA pro detekci S. aureus z CF respirační kultur, a přezkum ukázal, že MSA lze také přesně určit., aureus (>98%), pokud řádné chromogenní reakce probíhá, a tam je >1+ úroveň odpovídající žluté kolonie izolované na střední. Zřídka byly žluté kolonie v množství ≤1+ identifikovány jako koagulázově negativní stafylokoky nebo druhy Corynebacterium. Pokud žluté kolonie jsou pěstovány na MSA v množství ≤1+, nebo-li směs organismů se pěstuje, pak jeden by měl pokračovat s běžnou izolace a identifikace postupů, aby se vyloučila přítomnost S. aureus v těchto kulturách.,
schopnost provádět přesné testování citlivosti v Vitek-2 nástroje s izolátů odebraných přímo z MSA desky byla také hodnocena. Dohoda byla dosažena u 97% izolátů, přičemž byly zaznamenány pouze tři nesrovnalosti izolátů a pouze jedno antibiotikum na daný izolát. Tyto tři organismy vykazovaly odchylky v obou erytromycin (2 izoláty) nebo klindamycin (1 izolát) citlivost, a ne rozdíly byly zaznamenány pro stanovení přítomnosti oxacilin odpor (69 izolátů) nebo oxacilin citlivost (31 izolátů). Vzhledem k tomu, všechny naše S., aureus izolátů byly také testovány na přítomnost indukovatelných klindamycin odpor s D test, izoláty byly řádně hlášeny jako rezistentní k oběma klindamycin a erythromycin, jako všechny tři neshodné organismy byly D test pozitivní. Je to podobné zprávy přesné citlivosti výsledky z vyhodnocení využití kolonií přímo z CHROMagar Staph aureus střední provádí Flayhart a kolegové (2).
Na závěr, i když studie izoluje s., aureus byly subcultured na MSA a BA desky před testovány na citlivost, jeden by mohl rozumně shrnout z těchto zjištění, že testování citlivosti vhodně čisté, izolované, a inkubovány kolonie přímo od MSA inokulovaných vzorků může být dosaženo s podobnou jistotou, bez nutnosti subkultury na neselektivní médium před testováním. K ověření těchto zjištění jsou nutné další prospektivní studie využívající klinické vzorky., Kromě toho, organismy vykazující charakteristické žluté kolonie na MSA desky v množství >1+ může být hlášena jako S. aureus, bez další identifikace, testování, s >98% jistotou. Tyto metody nejen může snížit čas potřebný pro detekci a testování citlivosti S. aureus pro tuto populaci pacientů, ale může také snížit náklady na laboratorní prostřednictvím eliminace některé subkultury, média a reagencie identifikace v současné době používá v hlášení S. aureus z CF vzorky., Navíc, při využití MSA ke svému maximálnímu potenciálu, pokud jde o respirační kultury CF, není třeba přidávat novější, dražší selektivní média.