acid-rapid
Acid-rapid pata este o pată diferențială utilizată pentru a identifica organisme acid-rapid, cum ar fi membrii genului Mycobacterium. Organismele acide rapide sunt caracterizate de pereți celulari asemănătoare ceară, aproape impermeabili; ele conțin acid micolic și cantități mari de acizi grași, ceruri și lipide complexe. Acest tip de perete celular este rezistent la majoritatea compușilor, prin urmare organismele acide rapide necesită o tehnică specială de colorare.,pata primară utilizată în colorarea rapidă a acidului, carbol fuchsin, este solubilă în lipide și conține fenol, care ajută pata să pătrundă în peretele celular. Acest lucru este în continuare asistat de adăugarea de căldură sub formă de căldură (abur). Aburul ajută la slăbirea stratului ceros și promovează intrarea petei primare în interiorul celulei. Frotiul este apoi clătit cu un decolorant foarte puternic, care îndepărtează pata de toate celulele non-acide rapide, dar nu pătrunde în peretele celular al organismelor acide rapide., Celulele decolorate non-acide rapide preiau apoi contra-pata, care în cazul nostru este albastru de metilen.
1. Lucrând în perechi, pregătiți trei diapozitive conform indicațiilor de mai jos (2 Pentru back-up și unul pentru a colora).
2. Etichetați fiecare diapozitiv și desenați un cerc în centrul diapozitivului cu un creion de ceară.
3. Pregătiți o emulsie pe fiecare lamelă cu 4 loopfuls de Staphylococcus epidermidis din cultura bulionului pe lamelă (acestea vor fi bacteriile negative acide rapide).
4., Apoi, adăugați o buclă de Mycobacterium chelonae (acestea sunt bacteriile dvs. acide rapide pozitive) și amestecați cele două bacterii împreună.
5. Lăsați diapozitivul(diapozitivele) să se usuce la aer pe încălzitoarele de diapozitive (în timp ce aceste diapozitive se usucă, pregătiți diapozitivele pentru pata de spori).
6. Odată ce lichidul s-a evaporat complet, căldura fixează bacteriile trecând-o prin flacără de trei ori.
7. Asigurați-vă că suportul de diapozitive din partea de sus a paharului dvs. este complet nivelat. Apoi, aduceți apa la fierbere în timp ce diapozitivele se usucă.aveți nevoie doar de aproximativ 200 mililitri de apă., Dacă adăugați mai multe, veți aștepta toată perioada de laborator pentru ca apa să fiarbă.
8. Odată ce apa se fierbe, așezați diapozitivul pe suportul de diapozitive deasupra apei fierbinți.
9. Acoperiți zona de frotiu pe diapozitiv cu o bucată pătrată de prosop de hârtie pre-tăiat. Asigurați-vă că nici o hârtie nu atârnă de pe diapozitiv.
10. Aplicați cu atenție pata de CARBOL FUCHSIN pe prosopul de hârtie.dacă apare o pată în apa pe care o fierbeți, vă rugăm să opriți și să aruncați apa pătată în depozitul de deșeuri lichide. Fumul de la carbol fuchsin poate fi toxic.
11., Aburiți cu pata pe diapozitiv timp de 7 minute, în timp ce aplicați continuu mai multă pată, astfel încât pătratul de hârtie să nu se usuce niciodată.
12. Scoateți ușor hârtia cu forceps și aruncați-o în paharul mic de hârtie care va fi furnizat pe banca dvs. Apoi, clătiți diapozitivul cu apă.
13. Puneți diapozitivul pe bazinul de colorare și clătiți ușor cu apă.
14. Decolorați cu 6 picături de alcool acid (nu etanol din setul de pete gram), apoi clătiți cu apă.
15. Counterstain cu albastru de metilen timp de 2 minute.
16., Clătiți cu apă și uscați cu hârtie bibuloasă (nu utilizați încălzitorul de diapozitive).
17. Examinați sub obiectivul obiectiv 100x cu imersie în ulei și înregistrați rezultatele.
culorile acestei imagini pot fi ușor dezactivate din cauza imprimării / copierii.