SYRE-RASK
Syre-rask flekken er en differensial beis som brukes til å identifisere syre-rask organismer som for eksempel medlemmer av slekten Mycobacterium. Syre-rask organismer er preget av voks-aktig, nesten ugjennomtrengelig celle vegger; de inneholder mycolic syre og store mengder fettsyrer, voks og sammensatte lipider. Denne typen av celleveggen er motstandsdyktig mot de fleste stoffer, derfor syre-rask organismer krever en spesiell farging teknikk.,
Den primære beis som brukes i syre-rask fargelegging, carbol fuchsin, er fettløselige og inneholder fenol, noe som bidrar til flekken trenge gjennom celleveggen. Dette er ytterligere assistert av tillegg av varme i form av varme (damp). Steam bidrar til å løsne opp voksaktig lag og fremmer oppføring av primære flekk inne i cellen. Den smører er deretter skylles med en veldig sterk decolorizer, som strimler flekken fra alle ikke-syre-fast-celler, men ikke trenge gjennom celleveggen av syre-rask organismer., Den decolorized ikke-syre-rask celler og deretter ta opp counterstain, som i vårt tilfelle er methylene blå.
1. Arbeide i par, utarbeide TRE lysbilder som anvist nedenfor (2 for back-up og en til flekken).
2. Merk hvert skyv og tegn en sirkel på midten av lysbildet med en voks blyant.
3. Forberede en emulsjon på hvert lysbilde med 4 loopfuls av Staphylococcus epidermidis fra buljong kultur på dekselet (disse vil være syre-fast-negative bakterier).
4., Legg så til en loopful av Mycobacterium chelonae (disse er syre rask positive bakterier) og bland de to bakterier sammen.
5. La dekselet(s) til tørk på lysbildet warmers (mens disse lysbildene er tørking, forberede lysbilder for å spore flekken).
6. Når væsken har helt fordampet, varme fikse bakterier ved å føre det gjennom din flamme tre ganger.
7. Kontroller at prøvebrett på toppen av begeret er helt nivå. Så, ta med vann til å koke mens lysbildene er tørking.
Du trenger bare ca 200 milliliter vann., Hvis du vil legge til mer, du vil være venter alle lab periode for vannet til å koke.
8. Når vannet koker, kan du plassere din skyv på dekselet rack over kokende vann.
9. Dekker det området av din smøre på lysbilde med en firkantet stykke PRECUT papir håndkle. Sørg for at ingen av papir er henging av dekselet.
10. Forsiktig bruk av den CARBOL FUCHSIN beis til papir håndkle.
Hvis en flekk vises i vannet du kokte, kan du stoppe og kast farget vann i flytende avfall. Dampen fra carbol fuchsin kan være giftig.
11., Steam med flekken på lysbildet for 7 minutter mens kontinuerlig søker mer flekken, slik at papiret square aldri tørker ut.
12. Forsiktig fjern papiret med en pinsett og kast det i liten avfall papir cup som vil bli gitt på benken. Deretter skylles lysbilde med vann.
13. Sett dekselet på farging vask og skyll forsiktig med vann.
14. Decolorize med 6 dråper syre alkohol (ikke etanol fra gramfarging kit), og skyll deretter med vann.
15. Counterstain med methylene blå i 2 minutter.
16., Skyll med vann og tørk med bibulous papir (ikke bruk skyv varmere).
17. Undersøke under 100X objektiv med olje, innlevelse og ta opp dine resultater.
fargene på dette bildet kan være noe av på grunn av utskrift/kopiering.