syrefaste
syrefaste pletten er en differentieret plet bruges til at identificere syre-hurtig organismer, såsom medlemmer af slægten Mycobacterium. Syrefaste organismer er karakteriseret ved vokslignende, næsten uigennemtrængelige cellevægge; de indeholder mycolsyre og store mængder fedtsyrer, voks og komplekse lipider. Denne type cellevæg er resistent over for de fleste forbindelser, derfor kræver syrefaste organismer en særlig farvningsteknik.,
den primære plet, der anvendes til syrefast farvning, carbol fuchsin, er lipidopløselig og indeholder phenol, hvilket hjælper pletten med at trænge ind i cellevæggen. Dette hjælpes yderligere ved tilsætning af varme i form af varme (damp). Damp hjælper med at løsne det voksagtige lag og fremmer indtræden af den primære plet inde i cellen. Smøret skylles derefter med en meget stærk affarvningsmiddel, der fjerner pletten fra alle ikke-syrefaste celler, men ikke gennemsyrer cellevæggen af syrefaste organismer., De affarvede ikke-syre-hurtige celler optager derefter modskindet, som i vores tilfælde er methylenblåt.
1. Arbejd parvis, forbered tre dias som angivet nedenfor (2 til back-up og en til at plette).
2. Mærk hvert dias, og tegn en cirkel på midten af diaset med en voksblyant.
3. Forbered en emulsion på hvert dias med 4 loopfuls af Staphylococcus epidermidis fra din bouillonkultur på diaset (disse vil være dine syrefaste negative bakterier).
4., Derefter, tilføje en loopful af Mycobacterium chelonae (disse er dine syre hurtigt positive bakterier) og bland de to bakterier sammen.
5. Lad objektglassene lufttørre på objektglassene (mens disse objektglas tørrer, skal du forberede dine dias til sporefarven).
6. Når væsken er helt fordampet, skal du varme bakterierne ved at føre den gennem din flamme tre gange.
7. Sørg for, at slide rack på toppen af dit bægerglas er helt niveau. Derefter bringes dit vand til at koge, mens objektglassene tørrer.
du behøver kun omkring 200 ml vand., Hvis du tilføjer mere, vil du vente alle lab periode for dit vand at koge.
8. Når vandet koger, skal du placere dit dias på glidestativet over det kogende vand.
9. Dæk området med dit smear på diaset med et firkantet stykke forudskåret papirhåndklæde. Sørg for, at intet af papiret hænger ud af diaset.
10. Påfør CARBOL FUCHSIN-pletten forsigtigt på papirhåndklædet.
Hvis der vises en plet i det vand, du koger, skal du stoppe og kassere det farvede vand i bortskaffelsen af flydende affald. Dampene fra carbol fuchsin kan være giftige.
11., Damp med pletten på objektglasset i 7 minutter, mens du kontinuerligt påfører mere plet, så papirkurven aldrig tørrer ud.
12. Fjern forsigtigt papiret med pincet og Kass INR det i den lille papirkop, der leveres på din bænk. Skyl derefter objektglasset med vand.
13. Sæt objektglasset på dit farvningsbassin og Skyl forsigtigt med vand.
14. Affarv med 6 dråber sur alkohol (ikke ethanol fra dit gram-pletsæt), skyl derefter med vand.
15. Counterstain med methylenblåt i 2 minutter.
16., Skyl med vand og tør med bibelpapir (brug ikke glidevarmeren).
17. Undersøg under 100 objective objektivlinsen med nedsænkning af olie, og registrer dine resultater.
farverne på dette billede kan være lidt slukket på grund af udskrivning / kopiering.