KYSELINA-RYCHLE

Acid-fast stain je diferenciální skvrna slouží k identifikaci acidorezistentní organismy, jako jsou členové rodu Mycobacterium. Acidorezistentní organismy se vyznačují vosk-jako téměř nepropustné buněčné stěny; obsahují mykolové kyseliny a velké množství mastných kyselin, vosky, složité lipidy. Tento typ buněčné stěny je odolný vůči většině sloučenin, proto kyselé organismy vyžadují speciální barvicí techniku.,

primární skvrny používán v acidorezistentní barvení, carbol fuchsinem, je lipid-rozpustný a obsahuje fenol, který pomáhá skvrnu proniknout buněčnou stěnu. To je dále podporováno přidáním tepla ve formě tepla (páry). Pára pomáhá uvolnit voskovou vrstvu a podporuje vstup primární skvrny uvnitř buňky. Nátěru je potom opláchnout s velmi silným decolorizer, což proužky skvrny ze všech non-acidorezistentní buňky, ale nemusí projevit buněčné stěny acidorezistentní organismy., Odbarvené nekyselinově rychlé buňky pak zabírají protibarvení, což je v našem případě methylenová modř.

1. Při práci ve dvojicích připravte tři snímky podle pokynů níže (2 pro zálohování a jedno pro barvení).

2. Označte každý snímek a nakreslete kruh ve středu snímku voskovou tužkou.

3. Připravte emulzi na každém snímku se 4 loopfuls Staphylococcus epidermidis z bujónové kultury na snímek (to budou vaše kyselé rychlé negativní bakterie).

4., Pak přidejte jeden loopful Mycobacterium chelonae (to jsou vaše kyselé rychlé pozitivní bakterie) a smíchejte obě bakterie dohromady.

5. Nechte snímek(y) vyschnout na slide ohřívače (zatímco tyto snímky jsou sušení, připravte své snímky pro sportovní skvrna).

6. Jakmile se kapalina zcela odpaří, zahřejte bakterie tak, že ji třikrát projdete plamenem.

7. Ujistěte se, že posuvný stojan na horní straně kádinky je zcela na úrovni. Poté přiveďte vodu k varu, zatímco skluzavky suší.

potřebujete pouze asi 200 mililitrů vody., Pokud přidáte další, budete čekat celou laboratorní dobu, než se vaše voda vaří.

8. Jakmile se voda vaří, umístěte snímek na posuvný stojan nad vroucí vodu.

9. Zakryjte oblast vašeho nátěru na sklíčko čtvercovým kusem papírového ručníku. Ujistěte se, že žádný z papíru visí ze snímku.

10. Opatrně naneste skvrnu CARBOL FUCHSIN na papírový ručník.

Pokud se ve vroucí vodě objeví skvrna, zastavte a zlikvidujte znečištěnou vodu v likvidaci tekutého odpadu. Výpary z karbolového fuchsinu mohou být toxické.

11., Pára se skvrnou na skluzu po dobu 7 minut při nepřetržitém nanášení více skvrn, takže papírový čtverec nikdy nevyschne.

12. Opatrně vyjměte papír kleštěmi a vyhoďte jej do malého kelímku na odpadní papír, který bude k dispozici na vaší lavičce. Poté opláchněte skluzavku vodou.

13. Položte snímek na barvicí misku a jemně opláchněte vodou.

14. Odbarvujte 6 kapkami kyselého alkoholu (nikoli ethanolem z vaší gram stain kit) a poté opláchněte vodou.

15. Counterstain s methylenovou modří po dobu 2 minut.

16., Opláchněte vodou a osušte bibulous papírem (nepoužívejte slide teplejší).

17. Prohlédněte si objektiv 100x s ponořením do oleje a zaznamenejte své výsledky.

barvy tohoto obrázku mohou být mírně vypnuty kvůli tisku/kopírování.